| 提要 | 第1-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-15页 |
| ·α-淀粉酶家族简介 | 第8-12页 |
| ·α-淀粉酶家族定义及分类 | 第8-10页 |
| ·α-淀粉酶家族反应机理 | 第10-11页 |
| ·α-淀粉酶家族结构域 | 第11-12页 |
| ·淀粉酶的应用与发展 | 第12-14页 |
| ·淀粉酶的应用 | 第12-13页 |
| ·淀粉酶的进化研究 | 第13-14页 |
| ·选题背景及研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 淀粉酶OPMA-G 及其突变体的克隆、表达与纯化 | 第15-34页 |
| ·引言 | 第15页 |
| ·实验材料 | 第15-16页 |
| ·菌种及载体 | 第15页 |
| ·实验试剂 | 第15-16页 |
| ·实验仪器 | 第16页 |
| ·实验方法 | 第16-28页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第16-17页 |
| ·突变体OPMA-GM1 和OPMA-GM2 基因的制备 | 第17-19页 |
| ·目的基因的酶切与纯化 | 第19-20页 |
| ·载体的制备 | 第20-21页 |
| ·目的基因与载体的连接 | 第21页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备（氯化钙法） | 第21页 |
| ·质粒的转化 | 第21-22页 |
| ·质粒的小量制备（碱裂解法） | 第22-23页 |
| ·质粒的大量制备与纯化 | 第23-24页 |
| ·紫外吸收法定量质粒DNA | 第24页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第24-25页 |
| ·目的蛋白在大肠杆菌不同区域的定位 | 第25页 |
| ·SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第25-26页 |
| ·亲和柱层析 | 第26页 |
| ·蛋白质同源序列对比和三维结构的模拟 | 第26-27页 |
| ·淀粉酶活力的测定 | 第27页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第27-28页 |
| ·结果与讨论 | 第28-33页 |
| ·突变体OPMA-GM1、OPMA-GM2 基因的克隆 | 第28-29页 |
| ·淀粉酶OPMA-G 和突变体OPMA-GM1、OPMA-GM2 的表达 | 第29页 |
| ·淀粉酶OPMA-G 的同源序列对比和三维结构的模拟 | 第29-31页 |
| ·淀粉酶OPMA-G 和突变体OPMA-GM1、OPMA-GM2 的纯化 | 第31-33页 |
| 小结 | 第33-34页 |
| 第三章 淀粉酶OPMA-G 及其突变体的酶学性质研究 | 第34-46页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·实验试剂 | 第34页 |
| ·实验仪器 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-38页 |
| ·淀粉酶活力的测定 | 第35页 |
| ·TLC 进行底物、产物特异性的分析 | 第35-36页 |
| ·高效液相色谱进行产物的分析 | 第36页 |
| ·产物生成曲线的绘制 | 第36页 |
| ·pH 对酶活性的影响 | 第36页 |
| ·温度对酶活性的影响 | 第36-37页 |
| ·金属离子和EDTA 对酶活性的影响 | 第37页 |
| ·Ca~(2+)对酶活性的影响 | 第37页 |
| ·动力学参数的测定 | 第37页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第37-38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-45页 |
| ·底物、产物特异性的分析 | 第38页 |
| ·淀粉酶作用淀粉的产物分析 | 第38-41页 |
| ·pH 对酶活性的影响 | 第41页 |
| ·温度对酶活性的影响 | 第41-42页 |
| ·金属离子及螯合剂对酶活性的影响 | 第42-43页 |
| ·Ca~(2+)对酶活性的影响 | 第43页 |
| ·突变位点的功能分析 | 第43-45页 |
| 小结 | 第45-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 摘要 | 第54-56页 |
| ABSTRACT | 第56-57页 |
