| 致谢 | 第10-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1. 文献综述 | 第16-48页 |
| 1.1 褐飞虱概述 | 第16-19页 |
| 1.1.1 褐飞虱形态特征 | 第16页 |
| 1.1.2 褐飞虱分布 | 第16-17页 |
| 1.1.3 褐飞虱危害特点 | 第17-18页 |
| 1.1.4 褐飞虱防治状况 | 第18-19页 |
| 1.2 RNA1(RNA interference)概述 | 第19-38页 |
| 1.2.1 RNAi的分子机制 | 第19-22页 |
| 1.2.2 RNAi的特点 | 第22-23页 |
| 1.2.3 昆虫RNAi实现方法 | 第23-24页 |
| 1.2.4 影响RNAi效率的因素 | 第24-25页 |
| 1.2.5 RNAi在植物中的应用 | 第25-28页 |
| 1.2.6 RNAi在昆虫中的应用 | 第28-36页 |
| 1.2.6.1 昆虫基因功能的研究 | 第28页 |
| 1.2.6.2 害虫防治中的应用 | 第28-36页 |
| 1.2.7 RNAi载体构建方法 | 第36-38页 |
| 1.3 V-ATPase概述 | 第38-41页 |
| 1.3.1 V-ATPase的结构 | 第38-39页 |
| 1.3.2 V_1的结构 | 第39-40页 |
| 1.3.3 V_0的结构 | 第40页 |
| 1.3.4 V-ATPase活性的调节 | 第40-41页 |
| 1.3.5 V-ATPase的功能 | 第41页 |
| 1.4 EcR(ecdysone receptor)概述 | 第41-44页 |
| 1.4.1 EcR的结构 | 第42-43页 |
| 1.4.2 EcR的功能 | 第43-44页 |
| 1.5 海藻糖合成酶(trehalose phosphate synthase,TPS)概述 | 第44-46页 |
| 1.5.1 海藻糖的功能 | 第44-45页 |
| 1.5.2 海藻糖合成酶基因的研究 | 第45-46页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第46-48页 |
| 2. 材料和方法 | 第48-56页 |
| 2.1 材料 | 第48-49页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第48页 |
| 2.1.2 植物材料 | 第48页 |
| 2.1.3 菌株 | 第48页 |
| 2.1.4 主要工具酶 | 第48页 |
| 2.1.5 主要试剂和试剂盒 | 第48-49页 |
| 2.1.6 各种培养基的配置 | 第49页 |
| 2.1.7 常用仪器 | 第49页 |
| 2.2 论文中涉及常用分子生物学实验方法 | 第49-56页 |
| 2.2.1 CTAB法提取植物基因组DNA | 第49-50页 |
| 2.2.2 PCR反应 | 第50页 |
| 2.2.3 PCR产物加A | 第50页 |
| 2.2.4 凝胶回收 | 第50-51页 |
| 2.2.5 PCR产物纯化 | 第51-52页 |
| 2.2.6 质粒提取 | 第52页 |
| 2.2.7 酶切反应 | 第52-53页 |
| 2.2.8 连接反应 | 第53页 |
| 2.2.9 T克隆 | 第53页 |
| 2.2.10 大肠杆菌TG1感受态制备(CaCl_2法) | 第53-54页 |
| 2.2.11 大肠杆菌的转化 | 第54页 |
| 2.2.12 根瘤土壤农杆菌(LBA4404)感受态的制备 | 第54-55页 |
| 2.2.13 根瘤土壤农杆菌(LBA4404)的电击转化 | 第55-56页 |
| 3. 褐飞虱饲喂法RNAi的研究 | 第56-69页 |
| 3.1 方法 | 第56-63页 |
| 3.1.1 dsRNA的合成 | 第56-59页 |
| 3.1.1.1 褐飞虱总RNA的提取及cDNA第一链的合成 | 第56-57页 |
| 3.1.1.2 dsRNA合成模板的PCR扩增 | 第57-58页 |
| 3.1.1.3 利用试剂盒进行dsRNA的合成及纯化 | 第58-59页 |
| 3.1.2 dsRNA稳定性的测定 | 第59-61页 |
| 3.1.3 褐飞虱dsRNA的饲喂 | 第61-63页 |
| 3.1.3.1 饲喂dsRNA对褐飞虱存活率的影响 | 第61-62页 |
| 3.1.3.2 饲喂dsRNA后qRT-PCR检测目的基因mRNA表达水平 | 第62-63页 |
| 3.2 实验结果 | 第63-68页 |
| 3.2.1 dsRNA的合成 | 第63-64页 |
| 3.2.1.1 dsRNA合成模板的PCR扩增获取 | 第63页 |
| 3.2.1.2 dsRNA的制备 | 第63-64页 |
| 3.2.2 dsRNA稳定性的检测 | 第64-65页 |
| 3.2.3 饲喂dsRNA对褐飞虱的影响 | 第65-68页 |
| 3.2.3.1 饲喂dsRNA对褐飞虱存活率的影响 | 第65-66页 |
| 3.2.3.2 饲喂dsRNA对褐飞虱靶标mRNA表达水平的影响 | 第66-68页 |
| 3.3 小结 | 第68-69页 |
| 4. 培育转基因水稻进行褐飞虱RNAi的研究 | 第69-102页 |
| 4.1 方法 | 第69-83页 |
| 4.1.1 干扰载体的构建 | 第69-74页 |
| 4.1.1.1 pUCm-T-253intron载体构建 | 第69-71页 |
| 4.1.1.2 pUCm-T-253intron-Gene载体构建 | 第71-72页 |
| 4.1.1.3 pUCm-T-Gene-253intron-Gene载体构建 | 第72-73页 |
| 4.1.1.4 1300-253intron-RNAi载体构建 | 第73-74页 |
| 4.1.2 转基因水稻的培育 | 第74-76页 |
| 4.1.2.1 水稻成熟胚愈伤组织的诱导 | 第74页 |
| 4.1.2.2 农杆菌与水稻愈伤的共培养 | 第74-75页 |
| 4.1.2.3 抗性愈伤组织的筛选 | 第75页 |
| 4.1.2.4 转化植株的再生与培养 | 第75-76页 |
| 4.1.3 转基因水稻的鉴定 | 第76-80页 |
| 4.1.3.1 PCR方法鉴定T_0代转基因水稻 | 第76页 |
| 4.1.3.2 T_0代转基因水稻dsRNA检测 | 第76-78页 |
| 4.1.3.3 T_1代转基因水稻dsRNA检测 | 第78页 |
| 4.1.3.4 T_1代转基因水稻siRNA检测 | 第78-80页 |
| 4.1.4 褐飞虱取食转基因水稻生测 | 第80-83页 |
| 4.1.4.1 转基因水稻对褐飞虱生长发育的影响 | 第80-82页 |
| 4.1.4.2 转基因水稻对褐飞虱目的基因mRNA的影响 | 第82页 |
| 4.1.4.3 转基因水稻对继代饲养第三代褐飞虱生长发育的影响 | 第82-83页 |
| 4.1.4.4 转基因水稻对继代饲养第三代褐飞虱目的基因mRNA的影响 | 第83页 |
| 4.2 实验结果 | 第83-97页 |
| 4.2.1 干扰载体的构建 | 第83-87页 |
| 4.2.1.1 pUCm-T-intron载体鉴定 | 第83-84页 |
| 4.2.1.2 pUCm-T-intron-Gene载体构建 | 第84-86页 |
| 4.2.1.3 pUCm-T-Gene-253intron-Gene载体构建 | 第86页 |
| 4.2.1.4 1300-253intron-RNAi载体构建 | 第86-87页 |
| 4.2.2 转基因水稻的鉴定 | 第87-91页 |
| 4.2.2.1 PCR方法鉴定T_0代转基因水稻 | 第87-88页 |
| 4.2.2.2 T_0代转基因水稻dsRNA检测 | 第88页 |
| 4.2.2.3 T_1代转基因水稻dsRNA检测 | 第88-90页 |
| 4.2.2.4 T_1代转基因水稻siRNA检测 | 第90-91页 |
| 4.2.3 褐飞虱取食转基因水稻生测 | 第91-97页 |
| 4.2.3.1 转基因水稻对褐飞虱生长发育的影响 | 第91-93页 |
| 4.2.3.2 转基因水稻对褐飞虱靶标mRNA的影响 | 第93-95页 |
| 4.2.3.3 转基因水稻对继代饲养第三代褐飞虱生长发育的影响 | 第95-96页 |
| 4.2.3.4 转基因水稻对继代饲养第三代褐飞虱靶标mRNA的影响 | 第96-97页 |
| 4.3 小结 | 第97-98页 |
| 4.4 总结与讨论 | 第98-102页 |
| 5. 对绿色组织特异表达抗虫抗草甘膦转基因Bt水稻S21的评价 | 第102-114页 |
| 5.1 引言 | 第102-105页 |
| 5.2 研究背景 | 第105-106页 |
| 5.3 研究目的 | 第106页 |
| 5.4 材料与方法 | 第106-108页 |
| 5.4.1 试验材料 | 第106页 |
| 5.4.2 供试昆虫 | 第106-107页 |
| 5.4.3 试验方法 | 第107-108页 |
| 5.4.3.1 转基因植株S21对草甘膦抗性的检测 | 第107页 |
| 5.4.3.2 转基因植株S21对二化螟杀虫活性的室内检测 | 第107页 |
| 5.4.3.3 转基因植株S21 Bt蛋白含量的测定 | 第107-108页 |
| 5.4.3.4 转基因植株S21农艺性状及抗虫效果的田间考查 | 第108页 |
| 5.5 结果 | 第108-112页 |
| 5.5.1 转基因植株S21对草甘膦的抗性 | 第108-109页 |
| 5.5.2 转基因植株S21对二化螟的杀虫活性 | 第109-110页 |
| 5.5.3 转基因植株S21 Bt蛋白含量的测定 | 第110页 |
| 5.5.4 转基因植株S21农艺性状及抗虫效果 | 第110-112页 |
| 5.6 小结与讨论 | 第112-114页 |
| 参考文献 | 第114-136页 |
| 附录Ⅰ 实验中所用主要溶液 | 第136-141页 |
| 附录Ⅱ 实验常用主要仪器 | 第141-142页 |
| 附录Ⅲ 基因序列 | 第142-143页 |
