| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-22页 |
| 第一章 Mark4 及相关代谢活动研究进展 | 第13-22页 |
| 1.1 Mark4 概述 | 第13-16页 |
| 1.1.1 Mark4 的结构与调控 | 第13-14页 |
| 1.1.2 MARKs 的功能 | 第14-15页 |
| 1.1.3 Mark4 的研究近况 | 第15-16页 |
| 1.2 线粒体的研究简述 | 第16-18页 |
| 1.2.1 线粒体相关功能 | 第16-17页 |
| 1.2.2 线粒体功能相关机理的研究 | 第17-18页 |
| 1.3 脂肪细胞分化研究简述 | 第18-20页 |
| 1.4 脂肪沉积与炎症关系的简述 | 第20-22页 |
| 第二部分 试验研究 | 第22-50页 |
| 前言 | 第22-23页 |
| 第二章 Mark4 基因对 3T3-L1 细胞脂代谢的影响 | 第23-33页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-27页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第23页 |
| 2.1.2 3T3-L1 前体脂肪细胞的培养和分化 | 第23-24页 |
| 2.1.3 转染 3T3-L1 前体脂肪细胞 | 第24页 |
| 2.1.4 细胞中总 RNA 的提取、cDNA 的合成及 real-time PCR | 第24-25页 |
| 2.1.5 细胞中总蛋白的提取及 Western Blot 检测 | 第25-26页 |
| 2.1.6 筛选最佳的 Mark4 干扰载体 | 第26页 |
| 2.1.7 Mark4 基因超表达效率和干扰效率的检测 | 第26-27页 |
| 2.1.8 3T3-L1 脂肪细胞的油红 O 染色 | 第27页 |
| 2.1.9 3T3-L1 脂肪细胞的 Bodipy 染色 | 第27页 |
| 2.1.10 培养基中游离脂肪酸的测定和甘油释放 | 第27页 |
| 2.2 数据统计与分析 | 第27页 |
| 2.3 结果 | 第27-31页 |
| 2.3.1 Mark4 基因干扰载体的筛选、超表达效率及干扰效率的检测 | 第27-28页 |
| 2.3.2 Mark4 基因对 3T3-L1 细胞脂肪沉积的作用 | 第28-29页 |
| 2.3.3 Mark4 对脂代谢关键因子转录水平的调控 | 第29-31页 |
| 2.3.4 Mark4 对脂代谢关键因子翻译水平的调控 | 第31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 Mark4 对 3T3-L1 细胞线粒体功能的影响 | 第33-41页 |
| 3.1 材料与方法 | 第33-35页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第33页 |
| 3.1.2 3T3-L1 前体脂肪细胞的培养和分化 | 第33页 |
| 3.1.3 转染 3T3-L1 前体脂肪细胞 | 第33页 |
| 3.1.4 细胞中总 RNA 的提取、cDNA 的合成及 real-time PCR | 第33-34页 |
| 3.1.5 细胞中线粒体 DNA 拷贝数的检测 | 第34页 |
| 3.1.6 细胞中总蛋白的提取及 Western Blot 检测 | 第34页 |
| 3.1.7 JC-1 染色检测线粒体膜通透性 | 第34页 |
| 3.1.8 JC-1 染色流式细胞术 | 第34页 |
| 3.1.9 Cyt-c 免疫荧光分析 | 第34-35页 |
| 3.2 数据统计与分析 | 第35页 |
| 3.3 结果 | 第35-39页 |
| 3.3.1 Mark4 基因对 3T3-L1 细胞线粒体膜通透性的影响 | 第35-36页 |
| 3.3.2 Mark4 基因对 3T3-L1 细胞中 Cyt-C 表达影响 | 第36-37页 |
| 3.3.3 Mark4 对 3T3-L1 细胞线粒体中关键基因表达及 mtDNA 数量的影响 | 第37-38页 |
| 3.3.4 Mark4 对 3T3-L1 细胞线粒体中相关信号通路的影响 | 第38-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-41页 |
| 第四章 Mark4 对 3T3-L1 细胞促炎症因子表达的影响及机制 | 第41-50页 |
| 4.1 材料与方法 | 第41-45页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第41-42页 |
| 4.1.2 3T3-L1 前体脂肪细胞的培养和分化 | 第42页 |
| 4.1.3 转染 3T3-L1 前体脂肪细胞 | 第42页 |
| 4.1.4 细胞中总 RNA 的提取、cDNA 的合成及 real-time PCR | 第42页 |
| 4.1.5 细胞中总蛋白的提取及 Western Blot 检测 | 第42页 |
| 4.1.6 生物信息学预测基因启动子区及引物合成 | 第42页 |
| 4.1.7 苯酚—氯仿抽提法提取基因组 DNA | 第42-43页 |
| 4.1.8 PCR 扩增与胶回收 | 第43页 |
| 4.1.9 T 克隆载体连接 | 第43页 |
| 4.1.10 转化 | 第43-44页 |
| 4.1.11 菌液 PCR 检测及测序检测 | 第44页 |
| 4.1.12 SOD 碱裂解提取质粒 | 第44-45页 |
| 4.1.13 荧光素酶报告载体的构建 | 第45页 |
| 4.2 数据统计与分析 | 第45页 |
| 4.3 结果 | 第45-48页 |
| 4.3.1 Mark4 对 3T3-L1 细胞中促炎因子表达的影响 | 第45-46页 |
| 4.3.2 Mark4 基因启动子区预测 | 第46-47页 |
| 4.3.3 Mark4 基因启动子区的扩增 | 第47页 |
| 4.3.4 Mark4 基因启动子片段的荧光素酶报告载体的构建 | 第47-48页 |
| 4.3.5 荧光素酶检测结果 | 第48页 |
| 4.4 讨论 | 第48-50页 |
| 结论 | 第50页 |
| 创新点 | 第50页 |
| 进一步研究内容 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 缩略词 | 第58-59页 |
| 作者简介 | 第59页 |
