| 项目支持 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第12-25页 |
| 第一章 哺乳动物睾丸组织冷冻保存的研究进展 | 第12-25页 |
| 1.1 睾丸组织冷冻保存的生物学意义 | 第12-13页 |
| 1.2 睾丸组织冷冻保护剂的应用 | 第13-15页 |
| 1.3 睾丸组织冷冻的国内外研究进展 | 第15页 |
| 1.4 睾丸组织的标志性酶 | 第15-17页 |
| 1.5 睾丸组织的关键活性基因以及蛋白 | 第17-21页 |
| 1.6 SSCs 的体外分离培养 | 第21-24页 |
| 1.7 睾丸组织冷冻保存技术的应用前景 | 第24页 |
| 1.8 本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 试验研究 | 第25-53页 |
| 第二章 冷冻保护剂对犊牛睾丸组织标志性酶活性的保护作用 | 第25-33页 |
| 2.1 材料和方法 | 第26-27页 |
| 2.1.1 材料 | 第26页 |
| 2.1.2 方法 | 第26-27页 |
| 2.2 结果与分析 | 第27-30页 |
| 2.2.1 新鲜犊牛睾丸组织 AKP、ACP、LDH 和β-D-Glucosidase 的活性测定 | 第27页 |
| 2.2.2 不同冷冻保护剂对犊牛睾丸组织 AKP 活性的冷冻保护作用 | 第27-28页 |
| 2.2.3 不同冷冻保护剂对犊牛睾丸组织 ACP 活性的冷冻保护作用 | 第28页 |
| 2.2.4 不同冷冻保护剂对犊牛睾丸组织 LDH 活性的冷冻保护作用 | 第28-29页 |
| 2.2.5 不同冷冻保护剂对犊牛睾丸组织β-D-Glucosidase 活性的冷冻保护作用 | 第29-30页 |
| 2.3 讨论 | 第30-32页 |
| 2.3.1 渗透性冷冻保护剂对犊牛睾丸组织的冷冻保护作用 | 第30-31页 |
| 2.3.2 非渗透性冷冻保护剂对犊牛睾丸组织的冷冻保护作用 | 第31-32页 |
| 2.3.3 梯度降温法在犊牛睾丸组织冷冻保存中的应用 | 第32页 |
| 2.4 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 冷冻保护剂对犊牛睾丸组织关键基因表达量的影响 | 第33-46页 |
| 3.1 材料和方法 | 第34-38页 |
| 3.1.1 材料 | 第34页 |
| 3.1.2 方法 | 第34-38页 |
| 3.2 结果与分析 | 第38-43页 |
| 3.2.1 总 RNA 提取结果的检测 | 第38页 |
| 3.2.2 引物特异性检测结果 | 第38页 |
| 3.2.3 实时荧光定量结果分析 | 第38-39页 |
| 3.2.4 冷冻保护剂对犊牛睾丸组织 CREM、Stra8 和 HSP70-2 基因相对表达量的影响 | 第39-41页 |
| 3.2.5 冷冻保护剂对犊牛睾丸组织 Oct4、SCF 和 C-KIT 基因相对表达量的影响 | 第41-43页 |
| 3.3 讨论 | 第43-45页 |
| 3.3.1 对犊牛睾丸组织关键基因功能的探讨 | 第43-44页 |
| 3.3.2 不同冷冻保护剂对犊牛睾丸组织关键基因表达量的影响 | 第44-45页 |
| 3.4 小结 | 第45-46页 |
| 第四章 犊牛睾丸组织冷冻保存后 SSCs 的培养与鉴定 | 第46-53页 |
| 4.1 材料和方法 | 第47-49页 |
| 4.1.1 材料 | 第47页 |
| 4.1.2 方法 | 第47-49页 |
| 4.2 结果与分析 | 第49-51页 |
| 4.2.1 冷冻保存后犊牛睾丸组织细胞活率的测定 | 第49页 |
| 4.2.2 犊牛 SSCs 的分离纯化 | 第49-50页 |
| 4.2.3 犊牛 SSCs 的鉴定 | 第50-51页 |
| 4.3 讨论 | 第51-52页 |
| 4.3.1 睾丸组织供体犊牛年龄的选择 | 第51页 |
| 4.3.2 犊牛 SSCs 分离纯化方法的选择 | 第51-52页 |
| 4.3.3 犊牛 SSCs 鉴定方法的选择 | 第52页 |
| 4.4 小结 | 第52-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 附录1 主要溶液的配制 | 第61-63页 |
| 附录2 冷冻保护液的配制 | 第63-64页 |
| 附录3 犊牛睾丸组织的冷冻保存 | 第64-65页 |
| 附录4 犊牛睾丸单细胞悬液的制备 | 第65-66页 |
| 附录5 组织或细胞中总 RNA 的提取 | 第66-67页 |
| 附录6 RNA 反转录操作步骤 | 第67-68页 |
| 缩略词 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介及发表论文、申请专利 | 第70页 |
