| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 第一章 前言综述 | 第11-19页 |
| 1 锌的生物学功能 | 第11-13页 |
| 1.1 锌的概述 | 第11-12页 |
| 1.2 锌与疾病 | 第12页 |
| 1.3 蜂王浆中的锌及其来源 | 第12-13页 |
| 2 锌转运蛋白的概述 | 第13-15页 |
| 2.1 锌转运体家族 | 第13-14页 |
| 2.2 锌转运蛋白的结构性质 | 第14页 |
| 2.3 ZnT7蛋白的研究进展 | 第14-15页 |
| 3 基因原核表达研究 | 第15-17页 |
| 3.1 真核基因的克隆 | 第15-16页 |
| 3.2 实时荧光定量PCR | 第16页 |
| 3.3 蛋白质印迹 | 第16页 |
| 3.4 免疫组化 | 第16-17页 |
| 3.5 生物信息学分析 | 第17页 |
| 4 研究目的和意义 | 第17-18页 |
| 5 技术路线 | 第18-19页 |
| 第二章 卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因的克隆及生物信息学分析 | 第19-34页 |
| 1 材料与试剂 | 第19-20页 |
| 1.1 供试材料 | 第19页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第19-20页 |
| 2 试验方法 | 第20-25页 |
| 2.1 ZnT-7-like基因的克隆及pMD19-T-ZnT-7-like基因载体构建 | 第20-22页 |
| 2.2 ZnT-7-like基因目的片段的克隆测序 | 第22-24页 |
| 2.3 ZnT-7-like基因生物信息学分析 | 第24-25页 |
| 3 结果与分析 | 第25-31页 |
| 3.1 ZnT-7-like基因的克隆及pMD19-T-ZnT-7-like载体构建 | 第25-26页 |
| 3.2 ZnT-7-like基因的生物信息学分析 | 第26-31页 |
| 4 讨论 | 第31-33页 |
| 5 结论 | 第33-34页 |
| 第三章 ZnT-7-like基因原核表达载体构建及多克隆抗体制备 | 第34-44页 |
| 1 材料与试剂 | 第34-35页 |
| 1.1 供试材料 | 第34页 |
| 1.2 菌株与载体 | 第34页 |
| 1.3 试剂与仪器 | 第34-35页 |
| 2 试验方法 | 第35-39页 |
| 2.1 表达性重组质粒pGEX-4T-1-ZnT-7-like的构建 | 第35-36页 |
| 2.2 pGEX-4T-1-ZnT-7-like融合蛋白的诱导表达 | 第36-37页 |
| 2.3 抗原制备及动物免疫 | 第37-38页 |
| 2.4 血清的分离 | 第38页 |
| 2.5 抗体的ELISA检测 | 第38页 |
| 2.6 Western Blot检测 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-41页 |
| 3.1 pGEX-4T-1-ZnT-7-like重组表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 3.2 GST-ZnT-7-like融合蛋白的诱导表达及纯化 | 第40-41页 |
| 3.3 兔抗卡蜂ZnT-7-like多克隆抗体的效价和特异性检测 | 第41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 5 结论 | 第43-44页 |
| 第四章 卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因的真核表达及亚细胞定位 | 第44-51页 |
| 1 材料与试剂 | 第44-45页 |
| 1.1 实验材料 | 第44页 |
| 1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 1.3 其它主要试剂的配制 | 第44页 |
| 1.4 主要的仪器设备 | 第44-45页 |
| 2 实验方法 | 第45-47页 |
| 2.1 重组质粒pEGFP-ZnT-7-like的构建及鉴定 | 第45页 |
| 2.2 细胞培养及传代 | 第45-46页 |
| 2.3 重组质粒pEGFP-ZnT-7-like转染DF-1细胞 | 第46页 |
| 2.4 ZnT-7-like基因在DF-1细胞中的mRNA表达检测 | 第46-47页 |
| 2.5 ZnT-7-like基因在DF-1细胞中的蛋白表达检测 | 第47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-49页 |
| 3.1 真核表达载体pEGFP-ZnT-7-like的构建和鉴定 | 第47页 |
| 3.2 重组质粒pEGFP-ZnT-7-like转染DF-1细胞的检测结果 | 第47-48页 |
| 3.3 RT-PCR检测ZnT-7-like基因的表达 | 第48-49页 |
| 3.4 WB检测细胞中蛋白的表达 | 第49页 |
| 4 讨论 | 第49页 |
| 5 结论 | 第49-51页 |
| 第五章 卡尼鄂拉蜂不同日龄工蜂咽下腺ZnT-7-like基因的差异表达 | 第51-63页 |
| 1 试验材料 | 第51-52页 |
| 1.1 供试材料 | 第51页 |
| 1.2 主要试剂 | 第51页 |
| 1.3 主要仪器 | 第51-52页 |
| 2 试验方法 | 第52-56页 |
| 2.1 ZnT-7-like基因在不同日龄卡蜂咽下腺中的表达水平检测 | 第52-54页 |
| 2.2 ZnT-7-like蛋白的蛋白免疫印迹分析 | 第54页 |
| 2.3 卡蜂王浆腺石蜡切片制作及ZnT-7-like蛋白的免疫组化分析 | 第54-56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-60页 |
| 3.1 RNA提取结果 | 第56页 |
| 3.2 实时荧光定量PCR的熔解曲线 | 第56-57页 |
| 3.3 标准曲线的绘制 | 第57-58页 |
| 3.4 卡蜂ZnT-7-like基因表达规律 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 全文结论 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读学位期间发表和参与发表的学术论文目录 | 第72-73页 |
