| 摘要 | 第4-8页 |
| abstract | 第8-12页 |
| 英文缩略语 | 第13-18页 |
| 第一部分 抑制Chk1磷酸化增强HER2阳性胃癌细胞对拉帕替尼的敏感性 | 第18-43页 |
| 1 前言 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-24页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-24页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第21页 |
| 2.2.2 细胞活性检测 | 第21-22页 |
| 2.2.3 蛋白免疫印迹 | 第22页 |
| 2.2.4 流式细胞术 | 第22页 |
| 2.2.5 集落形成实验 | 第22-23页 |
| 2.2.6 siRNA转染 | 第23页 |
| 2.2.7 免疫共沉淀 | 第23页 |
| 2.2.8 免疫荧光 | 第23-24页 |
| 2.2.9 统计学分析 | 第24页 |
| 3 结果 | 第24-40页 |
| 3.1 两种HER2阳性胃癌细胞系具有不同拉帕替尼敏感性 | 第24-26页 |
| 3.2 EGFR/HER2复合物形成与拉帕替尼敏感性无关 | 第26-27页 |
| 3.3 拉帕替尼诱导敏感细胞NCI-N87发生G1期阻滞 | 第27-29页 |
| 3.4 拉帕替尼抑制敏感细胞NCI-N87的Chk1磷酸化水平 | 第29-31页 |
| 3.5 siRNA下调Chk1蛋白表达增强拉帕替尼对MKN7细胞的增殖抑制 | 第31页 |
| 3.6 拉帕替尼诱导Chk1siRNA干扰的MKN7细胞发生G1期阻滞 | 第31-34页 |
| 3.7 siRNA下调Chk1表达增强拉帕替尼对MKN7细胞下游增殖信号通路的抑制作用 | 第34页 |
| 3.8 ATR抑制剂VE-821增强拉帕替尼对MKN7细胞的增殖抑制作用 | 第34-36页 |
| 3.9 ATR抑制剂VE-821联合拉帕替尼诱导MKN7细胞发生G1期阻滞 | 第36-38页 |
| 3.10 ATR抑制剂VE-821增强拉帕替尼对MKN7细胞下游增殖通路的抑制作用 | 第38页 |
| 3.11 ATR抑制剂VE-821增强拉帕替尼在MKN7中诱导的DNA损伤 | 第38-40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 5 结论 | 第41-43页 |
| 第二部分 Chk1磷酸化降低HER2阳性胃癌细胞对拉帕替尼的敏感性 | 第43-61页 |
| 6 前言 | 第43-44页 |
| 7 材料与方法 | 第44-48页 |
| 7.1 主要试剂和仪器 | 第44-46页 |
| 7.1.1 主要试剂 | 第45页 |
| 7.1.2 主要仪器 | 第45-46页 |
| 7.2 实验方法 | 第46-48页 |
| 7.2.1 细胞培养 | 第46页 |
| 7.2.2 细胞活性检测 | 第46页 |
| 7.2.3 蛋白免疫印迹 | 第46-47页 |
| 7.2.4 流式细胞术 | 第47页 |
| 7.2.5 质粒转染 | 第47页 |
| 7.2.6 免疫荧光 | 第47-48页 |
| 7.2.7 统计学分析 | 第48页 |
| 8 结果 | 第48-58页 |
| 8.1 过表达ATR可削弱拉帕替尼对敏感细胞的增殖抑制作用 | 第48-49页 |
| 8.2 过表达ATR可逆转拉帕替尼在敏感细胞中诱导的G1期阻滞 | 第49-51页 |
| 8.3 过表达ATR可逆转拉帕替尼对敏感细胞下游通路的抑制 | 第51页 |
| 8.4 过表达Chk1可削弱拉帕替尼对敏感细胞的增殖抑制作用 | 第51-52页 |
| 8.5 过表达Chk1可消除拉帕替尼在敏感细胞中诱导的G1期阻滞 | 第52-53页 |
| 8.6 过表达Chk1可逆转拉帕替尼对敏感细胞下游通路的抑制 | 第53-54页 |
| 8.7 ATR抑制剂可使敏感细胞对拉帕替尼进一步增敏 | 第54-55页 |
| 8.8 顺铂通过活化Chk1减弱NCI-N87细胞对拉帕替尼的敏感性 | 第55-58页 |
| 9 讨论 | 第58-60页 |
| 10 结论 | 第60-61页 |
| 第三部分 KRT8作为Chk1的下游分子调控HER2阳性胃癌细胞对拉帕替尼的敏感性 | 第61-75页 |
| 11 前言 | 第61-62页 |
| 12 材料与方法 | 第62-66页 |
| 12.1 主要试剂和仪器 | 第62-64页 |
| 12.1.1 主要试剂 | 第62-63页 |
| 12.1.2 主要仪器 | 第63-64页 |
| 12.2 实验方法 | 第64-66页 |
| 12.2.1 细胞培养 | 第64页 |
| 12.2.2 细胞活性检测 | 第64页 |
| 12.2.3 蛋白免疫印迹 | 第64页 |
| 12.2.4 siRNA转染 | 第64-65页 |
| 12.2.5 质粒转染 | 第65页 |
| 12.2.6 RNA提取及RT-qPCR技术检测基因mRNA表达 | 第65-66页 |
| 12.2.7 GeneExpressionOmnibus(GEO)数据库分析 | 第66页 |
| 12.2.8 统计学分析 | 第66页 |
| 13 结果 | 第66-72页 |
| 13.1 KRT8高表达与胃癌细胞的曲妥珠单抗耐药性相关 | 第66-67页 |
| 13.2 下调KRT8蛋白表达增强MKN7细胞对拉帕替尼的敏感性 | 第67-68页 |
| 13.3 上调KRT8蛋白表达降低NCI-N87细胞对拉帕替尼的敏感性 | 第68-69页 |
| 13.4 下调Chk1蛋白表达诱导胃癌细胞系KRT8的mRNA及蛋白水平下调 | 第69-71页 |
| 13.5 过表达Chk1蛋白诱导胃癌细胞系KRT8mRNA及蛋白水平显著上调 | 第71-72页 |
| 14 讨论 | 第72-74页 |
| 15 结论 | 第74-75页 |
| 本研究创新性的自我评价 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-87页 |
| 综述 | 第87-101页 |
| 参考文献 | 第93-101页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 个人简历 | 第103页 |
