| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 1 前言 | 第10-20页 |
| 1.1 鹅细小病毒概述 | 第10-12页 |
| 1.1.1 鹅细小病毒的理化特征 | 第10页 |
| 1.1.2 鹅细小病毒的培养特征 | 第10-11页 |
| 1.1.3 GPV的分类地位 | 第11-12页 |
| 1.2 小鹅瘟的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2.1 小鹅瘟的流行病学特点 | 第12页 |
| 1.2.2 小鹅瘟的临床症状及病理变化 | 第12-13页 |
| 1.2.3 小鹅瘟的诊断 | 第13-14页 |
| 1.2.4 小鹅瘟的防治 | 第14-15页 |
| 1.3 鹅细小病毒的分子生物学特点 | 第15-17页 |
| 1.3.1 基因组结构 | 第15页 |
| 1.3.2 开放阅读框及编码区的分布 | 第15-16页 |
| 1.3.3 GPV的结构蛋白 | 第16页 |
| 1.3.4 GPV的非结构蛋白 | 第16-17页 |
| 1.4 鹅细小病毒适应株的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.4.1 鹅胚和鸭胚适应株的研究进展 | 第17页 |
| 1.4.2 成纤维细胞适应株的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.5 细胞系的概述 | 第18-19页 |
| 1.5.1 细胞系、细胞株及克隆 | 第18页 |
| 1.5.2 二倍体细胞的转化 | 第18-19页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-28页 |
| 2.1 材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 病毒株及实验动物 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.4 引物设计及序列分析软件 | 第21页 |
| 2.1.5 主要试剂的配置 | 第21-22页 |
| 2.2 鹅胚成纤维细胞系的建立 | 第22-23页 |
| 2.2.1 鹅胚成纤维细胞(GEF)的制备 | 第22页 |
| 2.2.2 GEF的传代及纯化 | 第22页 |
| 2.2.3 GEF的冻存与复苏 | 第22-23页 |
| 2.3 鹅细小病毒细胞适应毒株的培育 | 第23-24页 |
| 2.3.1 GEF细胞接种鹅细小病毒 | 第23页 |
| 2.3.2 PCR检测 | 第23-24页 |
| 2.3.3 GEF细胞中病毒增殖检测 | 第24页 |
| 2.3.4 半数感染量(TCID_(50))的测定 | 第24页 |
| 2.4 全基因组的扩增及序列分析 | 第24-28页 |
| 2.4.1 引物设计与合成 | 第24-25页 |
| 2.4.2 全基因组扩增 | 第25页 |
| 2.4.3 PCR产物的纯化 | 第25-26页 |
| 2.4.4 PCR产物与pMD-18T的载体的连接 | 第26页 |
| 2.4.5 氯化钙法制备DH5α | 第26-27页 |
| 2.4.6 连接产物的转化 | 第27页 |
| 2.4.7 pMD-18T载体克隆质粒的提取 | 第27-28页 |
| 3 结果 | 第28-35页 |
| 3.1 鹅胚成纤维细胞系的建立 | 第28-29页 |
| 3.1.1 原代细胞的生长状况 | 第28页 |
| 3.1.2 传代细胞的生长状况 | 第28页 |
| 3.1.3 细胞的冻存及复苏 | 第28-29页 |
| 3.2 鹅细小病毒细胞适应毒株的培育 | 第29-32页 |
| 3.2.1 显微镜观察CPE | 第29-30页 |
| 3.2.2 PCR检测 | 第30页 |
| 3.2.3 GEF细胞中的病毒增殖检测 | 第30-31页 |
| 3.2.4 TCID_(50)测定结果 | 第31-32页 |
| 3.3 全基因组序列分析 | 第32-35页 |
| 3.3.1 全基因组扩增 | 第32页 |
| 3.3.2 核苷酸序列分析 | 第32-33页 |
| 3.3.3 推导的氨基酸序列分析氨基酸 | 第33-35页 |
| 4 讨论 | 第35-39页 |
| 4.1 鹅胚成纤维细胞系的建立 | 第35-36页 |
| 4.2 GPV细胞适应株的培育 | 第36-37页 |
| 4.2.1 小鹅瘟疫苗的研究进展 | 第36页 |
| 4.2.2 细胞适应株的培育 | 第36-37页 |
| 4.2.3 细胞适应株的特点 | 第37页 |
| 4.3 全基因组序列分析 | 第37-39页 |
| 5 结论 | 第39-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第45页 |