| 内容提要 | 第4-5页 |
| 中文摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第1章 绪论 | 第16-31页 |
| 1.1 申克氏孢子丝菌和申克氏孢子丝菌病 | 第16-18页 |
| 1.1.1 申克氏孢子丝菌概述 | 第16页 |
| 1.1.2 孢子丝菌病流行趋势 | 第16-17页 |
| 1.1.3 申克氏孢子丝菌细胞壁的生物学特征 | 第17-18页 |
| 1.2 黑色素是双相型病原真菌的重要致病因子 | 第18-20页 |
| 1.2.1 双相型病原真菌黑色素的特性 | 第18-19页 |
| 1.2.2 黑色素增强双相型病原真菌对吞噬细胞的抗性 | 第19页 |
| 1.2.3 黑色素增强双相型病原真菌对环境胁迫的抗性 | 第19-20页 |
| 1.3 蛋白泛素化系统及其应用 | 第20-22页 |
| 1.3.1 蛋白磷酸化药物研究现状 | 第20-21页 |
| 1.3.2 泛素化比磷酸化更复杂 | 第21页 |
| 1.3.3 泛素化和磷酸化调控机制比较 | 第21-22页 |
| 1.4 根癌农杆菌介导丝状真菌遗传转化研究进展 | 第22-29页 |
| 1.4.1 丝状真菌转化方法研究进展 | 第22-24页 |
| 1.4.2 农杆菌介导的丝状真菌遗传转化研究进展 | 第24-26页 |
| 1.4.3 根癌农杆菌用于丝状真菌功能基因组学研究进展 | 第26-29页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第29-30页 |
| 1.6 技术路线图 | 第30-31页 |
| 第2章 根癌农杆菌介导的申克氏孢子丝菌遗传转化体系的建立 | 第31-42页 |
| 2.1 材料 | 第31-34页 |
| 2.1.1 菌株 | 第31-32页 |
| 2.1.2 培养基 | 第32页 |
| 2.1.3 试剂 | 第32-33页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第33-34页 |
| 2.2 方法 | 第34-35页 |
| 2.2.1 申克氏孢子丝菌对潮霉素的敏感性 | 第34页 |
| 2.2.2 申克氏孢子丝菌分生孢子的制备 | 第34页 |
| 2.2.3 农杆菌细胞的制备 | 第34页 |
| 2.2.4 农杆菌与申克氏孢子丝菌共培养 | 第34-35页 |
| 2.2.5 筛选转化子 | 第35页 |
| 2.2.6 检测转化子的遗传稳定性 | 第35页 |
| 2.3 结果 | 第35-38页 |
| 2.3.1 申克氏孢子丝菌对潮霉素的敏感性 | 第35页 |
| 2.3.2 农杆菌预培养过程中添加AS 对申克氏孢子丝菌转化的影响 | 第35-36页 |
| 2.3.3 共培养时间对转化效率的影响 | 第36-37页 |
| 2.3.4 不同农杆菌菌株对转化效率的影响 | 第37页 |
| 2.3.5 表型改变突变体的筛选 | 第37-38页 |
| 2.3.6 转化子遗传稳定性 | 第38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-41页 |
| 2.4.1 真菌转化受体 | 第38-39页 |
| 2.4.2 根癌农杆菌预培养过程中添加乙酰丁香酮 | 第39-40页 |
| 2.4.3 根癌农杆菌菌株 | 第40-41页 |
| 2.4.4 共培养条件 | 第41页 |
| 2.5 本章小结 | 第41-42页 |
| 第3章 申克氏孢子丝菌T-DNA 插入突变体的分子分析 | 第42-60页 |
| 3.1 材料 | 第42-44页 |
| 3.1.1 菌株 | 第42页 |
| 3.1.2 试剂 | 第42-43页 |
| 3.1.3 引物 | 第43-44页 |
| 3.1.4 试剂盒和酶 | 第44页 |
| 3.1.5 仪器设备 | 第44页 |
| 3.2 方法 | 第44-48页 |
| 3.2.1 申克氏孢子丝菌基因组DNA 的提取 | 第44-45页 |
| 3.2.2 PCR 检测T-DNA 插入突变体 | 第45页 |
| 3.2.3 Southern blotting 检测突变体T-DNA 插入拷贝数 | 第45-46页 |
| 3.2.4 TAIL-PCR 分离突变体T-DNA 侧翼序列 | 第46-48页 |
| 3.2.5 TAIL-PCR 产物测序 | 第48页 |
| 3.3 结果 | 第48-53页 |
| 3.3.1 T-DNA 插入突变株PCR 检测 | 第48-49页 |
| 3.3.2 Southern blotting 检测突变体T-DNA 插入拷贝数 | 第49页 |
| 3.3.3 TAIL-PCR 扩增T-DNA 插入突变株侧翼序列 | 第49-52页 |
| 3.3.4 PCR 扩增申克氏孢子丝菌ATMT 转化子完整T-DNA | 第52-53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-58页 |
| 3.4.1 转化子中T-DNA 插入的拷贝数 | 第53-54页 |
| 3.4.2 T-DNA 插入位点侧翼序列的扩增 | 第54-58页 |
| 3.4.3 左臂或右臂丢失现象 | 第58页 |
| 3.5 本章小结 | 第58-60页 |
| 第4章 申克氏孢子丝菌色素缺陷突变株JLCC32757-M2013 分析 | 第60-83页 |
| 4.1 材料 | 第60-62页 |
| 4.1.1 菌株 | 第60页 |
| 4.1.2 实验动物 | 第60页 |
| 4.1.3 试剂和引物 | 第60-61页 |
| 4.1.4 仪器设备 | 第61-62页 |
| 4.2 方法 | 第62-64页 |
| 4.2.1 突变株JLCC32757-M2013 的形态观察 | 第62页 |
| 4.2.2 T-DNA 插入突变株JLCC32757-M2013 分子分析 | 第62页 |
| 4.2.3 实时荧光定量PCR 分析SsUBCc 基因和色素合成相关基因的表达 | 第62-63页 |
| 4.2.4 突变株JLCC32757-M2013 致病力分析 | 第63-64页 |
| 4.3 结果 | 第64-76页 |
| 4.3.1 突变株JLCC32757-M2013 的形态观察 | 第64-67页 |
| 4.3.2 T-DNA 插入突变株JLCC32757-M2013 分子分析 | 第67-69页 |
| 4.3.3 Real-time PCR 分析SsUBCc 基因和色素合成相关基因的表达 | 第69-71页 |
| 4.3.4 突变株JLCC32757-M2013 致病力分析 | 第71-76页 |
| 4.4 讨论 | 第76-81页 |
| 4.4.1 病原真菌黑色素与致病性 | 第76-78页 |
| 4.4.2 黑色素生物合成抑制剂的应用 | 第78-79页 |
| 4.4.3 泛素化与色素合成 | 第79-81页 |
| 4.5 本章小结 | 第81-83页 |
| 第5章 高通量筛选T-DNA 插入突变体的反向遗传学方法的建立 | 第83-93页 |
| 5.1 材料 | 第83-84页 |
| 5.1.1 菌株 | 第83页 |
| 5.1.2 试剂和引物 | 第83-84页 |
| 5.1.3 仪器设备 | 第84页 |
| 5.2 方法 | 第84-85页 |
| 5.2.1 确定PCR 检测所需核酸DNA 含量的最低浓度 | 第84-85页 |
| 5.2.2 构建申克氏孢子丝菌T-DNA 插入突变体池和DNA 池 | 第85页 |
| 5.3 结果 | 第85-88页 |
| 5.3.1 PCR 检测所需核酸DNA 的最低极限 | 第85-86页 |
| 5.3.2 申克氏孢子丝菌T-DNA 插入突变体池和DNA 池 | 第86-88页 |
| 5.4 讨论 | 第88-91页 |
| 5.4.1 突变体库将在后基因组时代发挥重要作用 | 第88-89页 |
| 5.4.2 突变体池的容量 | 第89-91页 |
| 5.5 本章小结 | 第91-93页 |
| 第6章 结论 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-110页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第110-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
