| 中文摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 前言 | 第11-26页 |
| 1 乙型肝炎病毒的研究现状 | 第11-15页 |
| 1.1 乙型肝炎病毒颗粒的形态特征 | 第11-12页 |
| 1.2 乙型肝炎病毒基因组结构及致病机制 | 第12-14页 |
| 1.3 乙型肝炎病毒的复制与转录 | 第14-15页 |
| 2 RNAI研究进展 | 第15-19页 |
| 2.1 RNAi发现 | 第15-16页 |
| 2.2 siRNA的作用机制 | 第16-18页 |
| 2.3 siRNA在抗乙型肝炎病毒方面的研究进展 | 第18-19页 |
| 3 AAV简介及AAV载体的研究进展 | 第19-21页 |
| 4 RNAI与HBV感染治疗相结合的理论依据 | 第21页 |
| 5 HBV动物模型研究进展 | 第21-23页 |
| 6 本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 6.1 木研究的目的 | 第23-24页 |
| 6.2 本研究的意义 | 第24页 |
| 7 本研究的技术路线 | 第24-26页 |
| 第一部分 HBV持续性感染小鼠模型的建立 | 第26-68页 |
| 材料与方法 | 第26-52页 |
| 1 实验材料 | 第26-32页 |
| 1.1 供试材料 | 第26页 |
| 1.2 供试菌种及质粒 | 第26-27页 |
| 1.3 扩增引物 | 第27-28页 |
| 1.4 主要的分子生物学及生化试剂 | 第28-29页 |
| 1.5 主要缓冲液及试剂配制 | 第29-31页 |
| 1.6 主要仪器设备及耗材 | 第31-32页 |
| 2 实验方法 | 第32-52页 |
| 2.1 质粒表达载体pSSV9-1.2HBV的构建 | 第32-36页 |
| 2.2 重组病毒AAV8-1.2HBV的制备及纯化 | 第36-39页 |
| 2.3 体外验证pSSV9-1.2HBV有效性 | 第39-40页 |
| 2.4 HBV持续性感染小鼠模型的构建 | 第40-48页 |
| 2.5 AAV8-1.2HBV小鼠模型肝组织纤维化指标检测 | 第48-51页 |
| 2.6 HBV持续性感染模型小鼠血浆和肝组织中HBV复制的确定 | 第51-52页 |
| 结果 | 第52-66页 |
| 1 重组质粒载体pSSV9-1.2HBV的构建 | 第52-54页 |
| 1.1 目的片段1.2HBV和线性化载体pSSV9(rep-/cap-)的获得 | 第53页 |
| 1.2 重组质粒pSSV9-1.2HBV的获得 | 第53-54页 |
| 2 pSSV9-1.2HBV体外有效介导HBV的表达 | 第54-55页 |
| 3 AAV8-1.2HBV体内有效介导HBV基因组的转移与复制 | 第55-58页 |
| 4 AAV8-1.2HBV能有效介导HBV基因在小鼠体内的表达 | 第58-60页 |
| 5 AAV8-1.2HBV注射小鼠不产生明显的急性炎症反应,但能诱导肝脏纤维化 | 第60-66页 |
| 讨论 | 第66-68页 |
| 第二部分 AAV2-SHRNA的体外筛选 | 第68-88页 |
| 材料与方法 | 第68-79页 |
| 1 实验材料 | 第68-71页 |
| 1.1 供试材料 | 第68页 |
| 1.2 供试菌种及质粒 | 第68-69页 |
| 1.3 供试Oligos及扩增引物 | 第69-70页 |
| 1.4 主要的分子生物学及生化试剂 | 第70页 |
| 1.5 主要仪器设备及耗材 | 第70-71页 |
| 2 实验方法 | 第71-79页 |
| 2.1 质粒表达载体pSC-H1-shRNA的构建 | 第71-74页 |
| 2.2 质粒表达载体pSC-H1-shRNA_(multiple)的构建 | 第74-79页 |
| 结果 | 第79-86页 |
| 1 AAV2-shRNA体外抗病毒效果评估 | 第79-83页 |
| 1.1 质粒表达载体pSC-H1-shRNA构建 | 第79-81页 |
| 1.2 AAV2-shRNA体外抗病毒效果评估 | 第81-83页 |
| 2 AAV2-shRNA_(multiple)体外抗病毒效果比较 | 第83-86页 |
| 2.1 质粒表达载体pSC-H1-shRNA_(multiple)的构建 | 第83-84页 |
| 2.2 AAV2-shRNA_(multiple)体外抗病毒有效性的验证 | 第84-86页 |
| 讨论 | 第86-88页 |
| 第三部分 AAV2-SHRNA体内抗病毒效果的评估 | 第88-98页 |
| 材料与方法 | 第88-89页 |
| 1 实验材料 | 第88页 |
| 2 实验方法 | 第88-89页 |
| 结果 | 第89-96页 |
| 1 AAV2-shRNA1+3体内有效的抑制HBV的复制与转录 | 第89-90页 |
| 2 AAV2-shRNA1+3体内有效的抑制HBV的表达 | 第90-93页 |
| 3 体内注射AAV2-shRNA不引起急性炎症,并且药物治疗可改善肝脏纤维化程度 | 第93-96页 |
| 讨论 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-108页 |
| 附录 | 第108-113页 |
| 符号与缩略语 | 第108-110页 |
| 实验补充结果 | 第110-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
