| 中文摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 缩略语 | 第8-10页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| 1.1 分枝杆菌DNA复制及调控 | 第10-11页 |
| 1.2 分枝杆菌DnaG的研究现状 | 第11-13页 |
| 1.2.1 DnaG的研究现状 | 第11-13页 |
| 1.2.2 分枝杆菌中DnaG的研究现状 | 第13页 |
| 1.3 分枝杆菌中第二信使c-di-GMP的研究现状 | 第13-19页 |
| 1.3.1 c-di-GMP的研究现状 | 第13-17页 |
| 1.3.2 分枝杆菌中第二信使c-di-GMP的研究现状 | 第17-19页 |
| 1.4 课题研究的目的和意义 | 第19页 |
| 1.5 课题主要内容 | 第19-21页 |
| 2 实验材料和方法 | 第21-32页 |
| 2.1 试验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第21页 |
| 2.1.2 供试抗生素 | 第21-22页 |
| 2.1.3 供试质粒 | 第22页 |
| 2.1.4 供试培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.5 实验材料与试剂 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-32页 |
| 2.2.1 分子生物学基本操作 | 第24页 |
| 2.2.2 细菌双杂交实验 | 第24-25页 |
| 2.2.2.1 细菌双杂交筛选培养基的配置 | 第24页 |
| 2.2.2.2 细菌双杂交质粒的构建及转化 | 第24-25页 |
| 2.2.2.3 细菌双杂交点板 | 第25页 |
| 2.2.3 His标签蛋白和GST标签蛋白的亲和纯化 | 第25-27页 |
| 2.2.3.1 表达载体的构建 | 第25页 |
| 2.2.3.2 IPTG诱导蛋白质表达 | 第25-26页 |
| 2.2.3.3 含有6×His融合标签蛋白的亲和纯化 | 第26页 |
| 2.2.3.4 含有GST融合标签蛋白的亲和纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.3.5 蛋白的透析 | 第27页 |
| 2.2.3.6 抗体的制备 | 第27页 |
| 2.2.4 大分子相互作用检测 | 第27-30页 |
| 2.2.4.1 Pull down实验 | 第27-28页 |
| 2.2.4.2 体内免疫共沉淀实验(Co-IP) | 第28-29页 |
| 2.2.4.3 Western blotting检测 | 第29-30页 |
| 2.2.4.4 SPR实验 | 第30页 |
| 2.2.5 薄层层析 | 第30-31页 |
| 2.2.6 紫外交联实验 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-54页 |
| 3.1 耻垢分枝杆菌DnaG_(Msm)和Ms2196存在物理相互作用 | 第32-40页 |
| 3.1.1 细菌双杂交实验证明DnaG_(Msm)与Ms2196相互作用 | 第32-36页 |
| 3.1.1.1 dnaG_(Msm)和ms2196基因的克隆 | 第32-34页 |
| 3.1.1.2 细菌双杂交实验 | 第34-36页 |
| 3.1.2 Pull-down证明DnaG_(Msm)与Ms2196存在相互作用 | 第36-38页 |
| 3.1.2.1 His-DnaG_(Msm)和GST-Ms2196的表达纯化 | 第36-37页 |
| 3.1.2.2 Pull-down实验 | 第37-38页 |
| 3.1.3 Co-IP证明DnaG_(Msm)与Ms2196存在相互作用 | 第38-39页 |
| 3.1.4 SPR证明DnaG_(Msm)与Ms2196相互作用 | 第39-40页 |
| 3.2 DnaG_(Msm)C末端结构域(CTD)和Ms2196N末端结构域(NTD)存在相互作用 | 第40-45页 |
| 3.2.1 DnaG_(Msm)和Ms2196缺失突变体的截短 | 第40-41页 |
| 3.2.2 细菌双杂交实验证明DnaG_(Msm)CTD和Ms2196 NTD存在相互作用 | 第41-42页 |
| 3.2.3 Pull-down证明DnaG_(Msm) CTD和Ms2196 NTD存在相互作用 | 第42-44页 |
| 3.2.4 SPR实验证明DnaG_(Msm) CTD和Ms2196 NTD存在相互作用 | 第44-45页 |
| 3.3 DnaG_(Msm)结合c-di-GMP | 第45-49页 |
| 3.3.1 c-di-GMP的合成 | 第45-46页 |
| 3.3.2 紫外交联实验证明DnaG_(Msm)结合c-di-GMP | 第46-48页 |
| 3.3.3 DnaG_(Msm) CTD能够结合c-di-GMP | 第48-49页 |
| 3.4 c-di-GMP和GTP结合DnaG_(Msm)存在相互竞争 | 第49-51页 |
| 3.5 DnaG_(Msm)(121-461aa)和DnaG_(Msm)(461-636aa)都结合c-di-GMP和GTP | 第51-54页 |
| 4 总结与讨论 | 第54-57页 |
| 4.1 总结 | 第54-55页 |
| 4.2 讨论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
