| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 縮略语表 | 第12-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-26页 |
| 1.1 A型流感病毒基因编码蛋白质的结构和功能 | 第13-19页 |
| 1.1.1 HA蛋白的合成和表达 | 第14-15页 |
| 1.1.2 HA蛋白的结构和功能 | 第15-19页 |
| 1.2 猪流感的流行 | 第19-21页 |
| 1.3 甲型H1N1流感病毒的流行 | 第21-22页 |
| 1.3.1 甲型H1N1流感病毒在人群中的流行 | 第21-22页 |
| 1.3.2 甲型H1N1流感病毒在猪群中的流行情况 | 第22页 |
| 1.4 流感病毒的检测方法 | 第22-23页 |
| 1.5 胶体金检测试剂盒在检测流感病毒中的应用 | 第23-24页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第24-26页 |
| 第2章 猪流感病毒H3亚型的单克隆抗体制备、胶体金检测方法的建立及应用 | 第26-61页 |
| 2.1 材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 生物材料 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第27页 |
| 2.1.4 主要试剂配制 | 第27-28页 |
| 2.2 方法 | 第28-44页 |
| 2.2.1 免疫原的筛选 | 第28-30页 |
| 2.2.2 免疫原的制备 | 第30-31页 |
| 2.2.3 小鼠免疫 | 第31页 |
| 2.2.4 细胞融合 | 第31-34页 |
| 2.2.5 阳性杂交瘤细胞筛选 | 第34-35页 |
| 2.2.6 阳性杂交瘤细胞克隆化(有限稀释法) | 第35-36页 |
| 2.2.7 单克隆抗体的鉴定 | 第36页 |
| 2.2.8 单克隆抗体生产 | 第36页 |
| 2.2.9 特异性检测 | 第36-37页 |
| 2.2.10 病毒TCID50测定 | 第37页 |
| 2.2.11 间接免疫荧光检测 | 第37页 |
| 2.2.12 ELISA相加试验 | 第37页 |
| 2.2.13 杂交瘤细胞冻存和复苏 | 第37-38页 |
| 2.2.14 单克隆抗体稳定性鉴定 | 第38页 |
| 2.2.15 试验器皿的清洁 | 第38页 |
| 2.2.16 单克隆抗体的纯化 | 第38-39页 |
| 2.2.17 胶体金的制备 | 第39页 |
| 2.2.18 金标抗体的制备 | 第39页 |
| 2.2.19 结合垫、样品垫的预处理 | 第39页 |
| 2.2.20 金垫制备及抗体喷涂 | 第39页 |
| 2.2.21 免疫胶体金检测试剂盒的组装 | 第39页 |
| 2.2.22 免疫胶体金层析法各种最佳条件的选择 | 第39-43页 |
| 2.2.23 测试方法与评判 | 第43-44页 |
| 2.2.24 特异性试验 | 第44页 |
| 2.2.25 敏感性试验 | 第44页 |
| 2.2.26 对临床样品的检测 | 第44页 |
| 2.2.27 稳定性试验 | 第44页 |
| 2.3 结果与分析 | 第44-56页 |
| 2.3.1 免疫原的筛选 | 第44-46页 |
| 2.3.2 融合后筛选及克隆化培养结果 | 第46页 |
| 2.3.3 染色体计数结果 | 第46页 |
| 2.3.4 单抗亚类鉴定结果 | 第46页 |
| 2.3.5 单克隆抗体的HI及ELISA效价 | 第46-47页 |
| 2.3.6 单抗特异性试验结果 | 第47页 |
| 2.3.7 TCID50的测定 | 第47-48页 |
| 2.3.8 间接免疫荧光结果 | 第48-49页 |
| 2.3.9 ELISA相加试验结果 | 第49-50页 |
| 2.3.10 稳定性检测 | 第50页 |
| 2.3.11 纯化后单抗的浓度及纯化效果的评价 | 第50-52页 |
| 2.3.12 免疫胶体金层析法各种最佳条件的选择 | 第52-55页 |
| 2.3.13 特异性试验 | 第55页 |
| 2.3.14 敏感性试验 | 第55-56页 |
| 2.3.15 对临床样品的检测 | 第56页 |
| 2.3.16 稳定性试验 | 第56页 |
| 2.4 讨论 | 第56-61页 |
| 2.4.1 免疫原的筛选 | 第56-57页 |
| 2.4.2 抗原的制备及免疫 | 第57页 |
| 2.4.3 细胞融合和筛选 | 第57-58页 |
| 2.4.4 杂交瘤细胞的克隆及冻存复苏 | 第58页 |
| 2.4.5 杂交瘤细胞株筛选及冻存过程中污染的控制 | 第58页 |
| 2.4.6 染色体计数 | 第58-59页 |
| 2.4.7 免疫原的筛选 | 第59页 |
| 2.4.8 胶体金的制备 | 第59-60页 |
| 2.4.9 关于高度敏感的猪流感病毒胶体金检测试剂盒的制备 | 第60页 |
| 2.4.10 关于猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒的应用 | 第60-61页 |
| 第3章 猪流感病毒H3亚型和甲型H1N1二联胶体金检测试剂盒的制备及应用 | 第61-71页 |
| 3.1 材料 | 第61页 |
| 3.1.1 生物材料 | 第61页 |
| 3.1.2 主要试剂及材料 | 第61页 |
| 3.1.3 主要试剂的配制 | 第61页 |
| 3.2 方法 | 第61-66页 |
| 3.2.1 金标抗体的制备 | 第61页 |
| 3.2.2 猪流感病毒H3亚型和甲型H1N1二联胶体金检测试剂盒的组装 | 第61-63页 |
| 3.2.3 免疫胶体金层析法各种最佳条件的选择 | 第63-65页 |
| 3.2.4 特异性试验 | 第65-66页 |
| 3.2.5 敏感性试验 | 第66页 |
| 3.2.6 稳定性试验 | 第66页 |
| 3.3 结果与分析 | 第66-69页 |
| 3.3.1 抗体包被液的选择 | 第66页 |
| 3.3.2 结合垫处理液的选择 | 第66页 |
| 3.3.3 样品垫处理液的选择 | 第66页 |
| 3.3.4 金标抗体、喷膜单抗、羊抗鼠IgG喷涂量的确定 | 第66-67页 |
| 3.3.5 特异性试验 | 第67页 |
| 3.3.6 敏感性试验 | 第67-68页 |
| 3.3.7 稳定性试验结果 | 第68-69页 |
| 3.4 讨论 | 第69-71页 |
| 3.4.1 金标结合垫的制备 | 第69页 |
| 3.4.2 NC膜、结合垫及其处理液、样品垫及其处理液的选择 | 第69页 |
| 3.4.3 关于二联胶体金检测试剂盒 | 第69-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 致谢 | 第78-80页 |
| 附录 | 第80页 |
