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miRNA160通过SIARF10对番茄叶片失水和果实发育的调控作用

摘要第14-16页
Abstract第16-17页
缩略词语表第18-20页
第一章 文献综述第20-37页
    1.1 植物中的ARF基因家族第20-24页
        1.1.1 生长素响应因子概述第20-23页
        1.1.2 番茄中的ARF基因研究进展第23-24页
            1.1.2.1 SIARFs基因家族成员的鉴定和序列分析第23页
            1.1.2.2 ARFs的系统发育分析第23-24页
            1.1.2.3 SIARFs基因染色体定位第24页
    1.2 植物中miRNA生物合成及功能第24-27页
        1.2.1 miRNA简介第24-25页
        1.2.2 成熟miRNA的形成及作用机制第25页
        1.2.3 植物microRNA对生长发育的作用第25-27页
            1.2.3.1 生长素信号第25-26页
            1.2.3.2 miRNAs影响花器官与叶器官发育第26页
            1.2.3.3 miRNAs与逆境第26-27页
    1.3 生长素与赤霉素对番茄坐果的影响第27-29页
        1.3.1 番茄坐果过程第27-28页
        1.3.2 生长素和赤霉素的转录水平上调控第28页
        1.3.3 生长素与赤霉素相关突变体第28-29页
    1.4 生长素与脱落酸对植物生长发育的影响第29-31页
        1.4.1 ABA生物合成调控第29-30页
            1.4.1.1 生物合成途径和相关酶第29-30页
        1.4.2 ABA信号转导途径分析第30-31页
        1.4.3 生长素与ABA之间的相互作用对植物生长的影响第31页
    1.5 生长素与水通道蛋白(AQPs)第31-35页
        1.5.1 植物中的水通道蛋白(AQPs)第31-32页
        1.5.2 叶片中的水通道蛋白(AQPs)第32-33页
        1.5.3 水通道蛋白(AQPs)与水分胁迫的关系第33-34页
        1.5.4 水通道蛋白(AQPs)与植物激素的关系第34-35页
    1.6 本研究目的及意义第35-36页
    1.7 本研究的技术路线第36-37页
第二章 miR160对SIARF10调控番茄叶片失水的生理机能第37-48页
    2.1 材料与方法第37-39页
        2.1.1 植物材料第37页
        2.1.2 实验方法第37-39页
            2.1.2.1 离体叶片水分缺失试验第37-38页
            2.1.2.2 叶片水力导度测量第38页
            2.1.2.3 ABA和HgCl_2施用叶片第38页
            2.1.2.4 气孔观察与相关参数统计第38页
            2.1.2.5 ABA含量测定第38-39页
    2.2 结果与分析第39-46页
        2.2.1 miR160对SIARF10调控番茄叶片形态及水分缺失的作用第39-40页
        2.2.2 miR160对SIARF10调控番茄叶片气孔形态和导度的作用第40-41页
        2.2.3 miR160对SIARF10调控番茄叶片响应ABA的作用第41-42页
        2.2.4 miR160对SIARF10调控番茄叶片水通道蛋白促进叶片失水的作用第42-43页
        2.2.5 miR160对SIARF10调控番茄叶片水分缺失有重要作用第43-46页
    2.3 讨论第46-47页
    2.4 小结第47-48页
第三章 miR160对SIARF10调控番茄叶片失水的分子机制第48-72页
    3.1 材料与方法第48-52页
        3.1.1 材料第48页
        3.1.2 质粒与菌株第48页
        3.1.3 试验方法第48-52页
            3.1.3.1 转录组分析第48-49页
            3.1.3.2 实时荧光定量检测第49页
            3.1.3.3 ABA含量测定第49页
            3.1.3.4 启动子分析第49页
            3.1.3.5 蛋白原核表达及纯化第49-50页
            3.1.3.6 凝胶迁移试验(EMSA)第50页
            3.1.3.7 番茄启动子瞬时表达及GUS酶含量测定第50-51页
            3.1.3.8 酵母单杂交第51页
            3.1.3.9 原位杂交第51-52页
            3.1.3.10 PEG模拟干旱第52页
    3.2 结果与分析第52-68页
        3.2.1 35S:mSIARF10-6的转录组分析第53-57页
        3.2.2 上调表达AQPs基因的启动子分析第57页
        3.2.3 35S:mSIARF10-6中启动子GUS活性检测第57页
        3.2.4 ARF10与ABI5对AQPs基因启动子的结合分析第57-63页
        3.2.5 SIARF10与SIABI5瞬时表达对叶片水分缺失的影响第63-66页
        3.2.6 SIPIP2;4原位杂交定位第66-67页
        3.2.7 SIARF10连接Auxin和ABA信号参与介导叶片失水的调控机制第67页
        3.2.8 SIARF10和miR160表达水平随叶龄增长的变化第67-68页
        3.2.9 SIARF10诱导蛋白的rosstte菌株逆境条件下生长状况调查第68页
    3.3 讨论第68-71页
    3.4 小结第71-72页
第四章 miR160对SIARF10调控番茄果实发育的作用分析第72-83页
    4.1 材料与方法第72-73页
        4.1.1 植物材料和生长条件第72页
        4.1.2 试验用品第72页
        4.1.3 试验方法第72-73页
            4.1.3.1 IAA和GA处理第72-73页
            4.1.3.2 提取植物总RNA及定量和完整性检测第73页
            4.1.3.3 实时荧光定量引物设计与检测分析第73页
            4.1.3.4 石蜡切片第73页
            4.1.3.5 赤霉素和生长素含量测定第73页
    4.2 结果与分析第73-80页
        4.2.1 突变体子房发育随时间变化第73-74页
        4.2.2 IAA和GA调控坐果期果皮细胞分裂的显微分析第74-76页
        4.2.3 miRNAs调控的靶基因ARFs的表达模式第76-77页
        4.2.4 miRNA160与miRNA167的表达模式第77页
        4.2.5 SIARF10对果皮层数的影响第77-79页
        4.2.6 SIARF10对GA和IAA含量的影响第79页
        4.2.7 IAA和GA通过影响miRNAs调控的ARFs影响番茄果皮细胞层数第79-80页
    4.3 讨论第80-81页
    4.4 小结第81-83页
第五章 超表达miRNA160转基因番茄植物叶片发育异常第83-93页
    5.1 材料与方法第83-85页
        5.1.1 材料第83页
        5.1.2 方法第83-85页
            5.1.2.1 SImiRNA160前体的克隆第83-84页
            5.1.2.2 超表达miRNA160载体构建第84页
            5.1.2.3 番茄遗传转化第84页
            5.1.2.4 T_0代转基因植株的筛选与鉴定第84-85页
            5.1.2.5 Real time-PCR检测miRNA160在转基因植株中的表达第85页
            5.1.2.6 T_1代番茄转基因表型鉴定第85页
    5.2 结果与分析第85-90页
        5.2.1 Gateway技术构建超表达载体pB7WG2D.1-35S::SImiR160第85-86页
        5.2.2 转基因番茄植株的获得第86-87页
        5.2.3 转基因番茄植株的鉴定第87-88页
        5.2.4 SImiRNA160的表达分析第88-89页
        5.2.5 35S::SImiR160植株的叶片发育分析第89-90页
    5.3 讨论第90-91页
    5.4 小结第91-93页
全文总结与展望第93-96页
本论文特色与创新之处第96-97页
参考文献第97-110页
附录第110-118页
致谢第118-119页
攻读学位期间发表的学术论文第119页

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