| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-24页 |
| 1.1 粪类圆线虫 | 第12-15页 |
| 1.1.1 粪类圆线虫概述 | 第12页 |
| 1.1.2 粪类圆线虫病的现状 | 第12-14页 |
| 1.1.3 粪类圆线虫的相关研究及前景 | 第14-15页 |
| 1.2 蛋白激酶 | 第15-20页 |
| 1.2.1 蛋白激酶及其药物开发 | 第15-16页 |
| 1.2.2 非典型蛋白激酶 | 第16-17页 |
| 1.2.3 RIO蛋白激酶研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2.4 RIOK-2 晶体结构的研究 | 第18-20页 |
| 1.3 wHTH蛋白 | 第20页 |
| 1.4 蛋白质晶体学 | 第20-24页 |
| 1.4.1 蛋白质晶体学概述 | 第20-21页 |
| 1.4.2 蛋白质晶体学中的技术 | 第21-24页 |
| 2 研究目的意义 | 第24-25页 |
| 3 材料与方法 | 第25-42页 |
| 3.1 实验材料 | 第25-28页 |
| 3.1.1 实验动物以及实验用菌株、载体 | 第25页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第25-26页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第26-28页 |
| 3.2 实验溶液的配制 | 第28-31页 |
| 3.2.1 抗生素和培养基的制备 | 第28页 |
| 3.2.2 碱裂解法质粒抽提主要溶液 | 第28页 |
| 3.2.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）主要溶液 | 第28-29页 |
| 3.2.4 Western blot缓冲液 | 第29页 |
| 3.2.5 ELISA试验相关溶液 | 第29-30页 |
| 3.2.6 镍柱亲和纯化缓冲液 | 第30页 |
| 3.2.7 其它缓冲液 | 第30页 |
| 3.2.8 线虫收集用缓冲液 | 第30页 |
| 3.2.9 结晶及晶体操作耗材、试剂 | 第30-31页 |
| 3.3 实验方法 | 第31-42页 |
| 3.3.1 实验动物感染模型的建立以及虫体的收集 | 第31-32页 |
| 3.3.2 生物信息学分析网站及软件 | 第32页 |
| 3.3.3 引物的设计与合成 | 第32页 |
| 3.3.4 粪类圆线虫Ss-riok-2 基因的克隆 | 第32-36页 |
| 3.3.5 原核表达质粒的构建 | 第36页 |
| 3.3.6 粪类圆线虫Ss-riok-2 野生型、D228A突变型、截短型的原核表达 | 第36-38页 |
| 3.3.7 晶体筛选 | 第38-39页 |
| 3.3.8 多克隆抗体的制备 | 第39页 |
| 3.3.9 ELISA测定多抗血清效价 | 第39-40页 |
| 3.3.10 多克隆抗体血清IgG的纯化 | 第40页 |
| 3.3.11 粪类圆线虫全虫抗原的提取 | 第40页 |
| 3.3.12 Western blot检测融合蛋白及多克隆抗体的免疫反应活性 | 第40-42页 |
| 4 结果分析 | 第42-60页 |
| 4.1 粪类圆线虫Ss-riok-2 的生物信息学分析 | 第42-43页 |
| 4.1.1 粪类圆线虫Ss-riok-2 氨基酸序列比对 | 第42-43页 |
| 4.1.2 粪类圆线虫Ss-RIOK-2 抗原性和亲水性分析 | 第43页 |
| 4.2 粪类圆线虫Ss-riok-2 的克隆 | 第43-45页 |
| 4.2.1 粪类圆线虫野生型Ss-riok-2 的PCR扩增 | 第43-44页 |
| 4.2.2 粪类圆线虫突变型Ss-riok2D228A的PCR扩增 | 第44页 |
| 4.2.3 粪类圆线虫截短型Ss-riok2T的PCR扩增 | 第44-45页 |
| 4.3 粪类圆线虫Ss-riok-2 野生型、D228A突变型、截短型原核表达、蛋白纯化 | 第45-55页 |
| 4.3.1 粪类圆线虫Ss-riok-2 野生型、D228A突变型、截短型原核表达质粒的酶切鉴定 | 第45-47页 |
| 4.3.2 Ss-RIOK-2 野生型、D228A突变型和截短型的原核表达 | 第47-52页 |
| 4.3.3 蛋白的纯化 | 第52-55页 |
| 4.4 野生型Ss-RIOK-2、突变型Ss-RIOK2D228A、截短型Ss-RIOK2T的Western blot | 第55页 |
| 4.5 结晶条件探索 | 第55-58页 |
| 4.5.1 蛋白浓度的探索 | 第56页 |
| 4.5.2 结晶温度的探索 | 第56页 |
| 4.5.3 蛋白溶解缓冲液的探索 | 第56-57页 |
| 4.5.4 添加剂的探索 | 第57-58页 |
| 4.6 ELISA测定多抗血清效价 | 第58页 |
| 4.7 抗体的纯化 | 第58-59页 |
| 4.8 Western blot检测多克隆抗体的特异性 | 第59-60页 |
| 5 讨论 | 第60-64页 |
| 5.1 蛋白激酶Ss-RIOK-2 的一级结构分析 | 第60页 |
| 5.2 Ss-RIOK-2 的原核表达蛋白纯化以及蛋白特性 | 第60-62页 |
| 5.3 Ss-RIOK-2 的结晶条件探索 | 第62-63页 |
| 5.4 Ss-RIOK-2 多克隆抗体的制备 | 第63-64页 |
| 6 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 附录 | 第75页 |
