| 摘要 | 第5-8页 |
| Abshacrt | 第8-11页 |
| 1. 前言 | 第16-32页 |
| 1.1 牙鲆淋巴囊肿病毒的研究进展 | 第16-20页 |
| 1.1.1 鱼类淋巴囊肿病流行规律概述 | 第16页 |
| 1.1.2 LCD的病理学研究 | 第16-17页 |
| 1.1.3 鱼体对LCDV感染的免疫应答 | 第17页 |
| 1.1.4 LCDV分子结构 | 第17页 |
| 1.1.5 LCDV传播途径研究 | 第17-18页 |
| 1.1.6 LCDV的体外培养方法 | 第18页 |
| 1.1.7 LCD的诊断学研究 | 第18-19页 |
| 1.1.8 LCD的防治方法 | 第19-20页 |
| 1.2 动物病毒受体研究方法概述 | 第20-27页 |
| 1.2.1 病毒受体的生物学特性 | 第20页 |
| 1.2.2 病毒受体研究方法 | 第20-25页 |
| 1.2.3 水生动物病毒受体的研究进展 | 第25-26页 |
| 1.2.4 27.8kDa受体蛋白的研究进展 | 第26-27页 |
| 1.3 转录组学在动物病毒性疾病研究中的应用 | 第27-31页 |
| 1.3.1 转录组学介绍 | 第27页 |
| 1.3.2 转录组学研究常用技术介绍 | 第27-29页 |
| 1.3.3 转录组学技术在动物病毒性疾病研究中的应用 | 第29-31页 |
| 1.4 本论文的研究目的及意义 | 第31-32页 |
| 2. 牙鲆FG和HINAE细胞上27.8 kDa受体蛋白表达与LCDV感染的动态关系 | 第32-54页 |
| 2.1 牙鲆鳃细胞和胚胎细胞培养及LCDV提纯 | 第32-38页 |
| 2.1.1 实验材料与试剂 | 第32-33页 |
| 2.1.2 方法 | 第33-34页 |
| 2.1.3 结果 | 第34-37页 |
| 2.1.4 讨论 | 第37-38页 |
| 2.2 牙鲆27.8kDa受体蛋白与LCDV相互作用关系研究 | 第38-52页 |
| 2.2.1 材料与仪器 | 第38页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第38-43页 |
| 2.2.3 结果 | 第43-52页 |
| 2.2.4 讨论 | 第52页 |
| 本韋小结 | 第52-54页 |
| 3. 27.8kDa受体蛋白在牙鲆、大菱鲆和花鲈的组织分布及LCDV感染后的表达动态研究 | 第54-82页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第54-55页 |
| 3.1.1 实验对象 | 第54页 |
| 3.1.2 试剂及仪器 | 第54-55页 |
| 3.2 方法 | 第55-60页 |
| 3.2.1 组织冰冻切片的制备 | 第55页 |
| 3.2.2 间接免疫荧光实验(IIFA) | 第55页 |
| 3.2.3 石蜡切片的制备 | 第55-57页 |
| 3.2.4 免疫组织化学染色(IHC) | 第57-58页 |
| 3.2.5 病毒感染及取样 | 第58-59页 |
| 3.2.6 间接ELISA | 第59-60页 |
| 3.2.7 绝对荧光定量PCR | 第60页 |
| 3.2.8 血细胞中受体和病毒的分布 | 第60页 |
| 3.3 结果 | 第60-80页 |
| 3.3.1 间接免疫荧光定位27.8kDa受体蛋白的分布 | 第60-63页 |
| 3.3.2 免疫组织化学染色定位27.8kDa受体蛋白的分布 | 第63-66页 |
| 3.3.3 组织中27.8kDa受体蛋白感染病毒后的表达动态 | 第66-71页 |
| 3.3.4 病毒感染后组织中LCDV粒子的变化动态 | 第71-77页 |
| 3.3.5 感染后血细胞中病毒与27.8kDa受体蛋白的检测 | 第77-80页 |
| 3.4 讨论 | 第80-81页 |
| 本章小结 | 第81-82页 |
| 4. 27.8kDa受体蛋白在LCDV感染牙鲆白细胞的意义 | 第82-94页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第82-83页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第82页 |
| 4.1.2 试剂与仪器 | 第82-83页 |
| 4.2 方法 | 第83-86页 |
| 4.2.1 感染后牙鲆血细胞中LCDV与27.8 kDa受体蛋白检测 | 第83页 |
| 4.2.2 免疫电镜 | 第83-84页 |
| 4.2.3 流式细胞术 | 第84页 |
| 4.2.4 LCDV体外感染牙鲆白细胞及电镜观察 | 第84-85页 |
| 4.2.5 多荧光免疫染色 | 第85-86页 |
| 4.3 结果 | 第86-91页 |
| 4.3.1 感染病毒后全血细胞中27.8kDa受体及LCDV分布 | 第86页 |
| 4.3.2 牙鲆外周血白细胞的采集 | 第86-87页 |
| 4.3.3 免疫电镜 | 第87页 |
| 4.3.4 流式细胞术 | 第87-88页 |
| 4.3.5 LCDV体外感染白细胞的时间进程 | 第88-89页 |
| 4.3.6 27.8kDa受体蛋白在LCDV感染白细胞中的作用 | 第89-90页 |
| 4.3.7 CD3、IgM和IgD阳性白细胞的LCDV易感性检测 | 第90-91页 |
| 4.4 讨论 | 第91-93页 |
| 本章小结 | 第93-94页 |
| 5. 牙鲆感染LCDV后鳃组织的转录组学研究 | 第94-119页 |
| 5.1 材料与仪器 | 第94-95页 |
| 5.1.1 实验动物与病毒 | 第94页 |
| 5.1.2 试剂与仪器 | 第94-95页 |
| 5.2 方法 | 第95-99页 |
| 5.2.1 牙鲆攻毒实验 | 第95页 |
| 5.2.2 RNA提取 | 第95-96页 |
| 5.2.3 RNA质量检测 | 第96页 |
| 5.2.4 文库构建、库检及上机测序 | 第96-97页 |
| 5.2.5 生物信息学分析流程 | 第97页 |
| 5.2.6 RNA-Seq数据的验证 | 第97-99页 |
| 5.3 结果 | 第99-115页 |
| 5.3.1 RNA质量检测 | 第99-100页 |
| 5.3.2 测序数据质量汇总 | 第100页 |
| 5.3.3 拼接转录本的长度分布 | 第100-101页 |
| 5.3.4 基因功能注释 | 第101-104页 |
| 5.3.5 CDS预测 | 第104-106页 |
| 5.3.6 基因表达水平及差异基因分析 | 第106-110页 |
| 5.3.7 差异表达基因的GO分类 | 第110-111页 |
| 5.3.8 差异表达基因的KEGG分析 | 第111-112页 |
| 5.3.9 病毒入侵及机体免疫应对感染的相关基因 | 第112-114页 |
| 5.3.10 RNA-seq结果的qPCR验证 | 第114-115页 |
| 5.4 讨论 | 第115-118页 |
| 5.4.1 LCDV 27.8 kDa受体蛋白基因的差异表达 | 第116页 |
| 5.4.2 差异表达的细胞因子及相关基因 | 第116-117页 |
| 5.4.3 Toll样受体的应答变化 | 第117页 |
| 5.4.4 细胞凋亡相关基因的变化 | 第117页 |
| 5.4.5 获得性免疫相关基因 | 第117页 |
| 5.4.6 其他抗LCDV感染基因 | 第117-118页 |
| 本章小结 | 第118-119页 |
| 总结 | 第119-121页 |
| 参考文献 | 第121-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
| 个人简历 | 第134页 |
| 研究生期间的学术成果 | 第134页 |
