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猪圆环病毒2型衣壳蛋白Cap在果蝇S2细胞中的稳定表达及抗原性鉴定

摘要第9-11页
ABSTRACT第11-12页
缩略词表第13-14页
第1章 文献综述第14-29页
    1.1 猪圆环病毒2型流行病学第14-15页
        1.1.1 猪圆环病毒2型流行病学概述第14-15页
        1.1.2 猪圆环病毒2型的传播第15页
    1.2 猪圆环病毒2型分子生物学第15-18页
        1.2.1 猪圆环病毒的基因组第15-17页
        1.2.2 猪圆环病毒2型基因组主要编码蛋白及其功能第17-18页
    1.3 猪圆环病毒2型相关疾病第18-20页
        1.3.1 多系统衰竭综合征(PMWS)第18-19页
        1.3.2 猪呼吸道疾病综合征(PRDC)第19-20页
        1.3.3 猪皮炎与肾病综合征(PDNS)第20页
    1.4 猪圆环病毒2型的感染机制和免疫反应第20-22页
        1.4.1 猪圆环病毒2型感染和复制机制第20-21页
        1.4.2 猪圆环病毒2型致病机制和免疫调节第21-22页
    1.5 猪圆环病毒2型的常用诊断方法第22-24页
        1.5.1 聚合酶链式反应(PCR)第22-23页
        1.5.2 酶联免疫吸附法(ELISA)第23页
        1.5.3 电镜技术第23页
        1.5.4 免疫过氧化物酶单层细胞实验(IPMA)第23-24页
    1.6 猪圆环病毒2型疫苗研究概况第24-27页
        1.6.1 疫苗发展概况第24页
        1.6.2 现有商业化PCV 2 疫苗第24-25页
        1.6.3 疫苗研究进展第25-27页
    1.7 果蝇S2细胞表达系统第27页
    1.8 研究目的与意义第27-29页
第2章 稳定细胞株的筛选第29-42页
    2.1 材料与方法第30-37页
        2.1.1 细胞与载体第30页
        2.1.2 主要试剂第30-31页
        2.1.3 主要仪器第31页
        2.1.4 常用试剂的配置第31页
        2.1.5 PCV 2 Cap基因的PCR扩增第31-32页
        2.1.6 表达载体的构建第32-35页
        2.1.7 重组质粒DNA双酶切及测序鉴定第35页
        2.1.8 果蝇S2细胞培养第35-36页
        2.1.9 转染果蝇S2细胞与稳定细胞株筛选第36-37页
    2.2 结果与分析第37-40页
        2.2.1 PCV 2 Cap基因PCR扩增第37页
        2.2.2 重组质粒菌落的PCR鉴定第37-38页
        2.2.3 重组质粒的双酶切鉴定第38-39页
        2.2.4 Cap基因序列测定及分析第39页
        2.2.5 稳定细胞株筛选第39-40页
    2.3 讨论第40-42页
第3章 Cap蛋白诱导表达及抗原性分析第42-51页
    3.1 材料与方法第42-46页
        3.1.1 主要试剂与仪器第42-43页
        3.1.2 常用试剂配制第43页
        3.1.3 Cap融合蛋白在果蝇S2细胞中的诱导表达与分析第43-44页
        3.1.4 Western-Blot检测目的蛋白第44-45页
        3.1.5 间接免疫荧光(IFA)检测S2细胞中Cap蛋白的表达第45页
        3.1.6 透射电镜(TEM)观察PCV 2 病毒样颗粒(VLPs)组装情况第45-46页
        3.1.7 超速离心纯化猪圆环病毒2型病毒样颗粒(PCV 2 VLPs)第46页
        3.1.8 间接ELISA检测抗原性与纯化效果第46页
    3.2 结果与分析第46-49页
        3.2.1 Western Blot检测目的蛋白Cap第46-47页
        3.2.2 间接免疫荧光(IFA)检测外源基因表达第47-48页
        3.2.3 透射电镜观测第48-49页
        3.2.4 间接ELISA检测抗原性与纯化效果第49页
    3.3 讨论第49-51页
第4章 PCV 2 VLPs对小鼠免疫效果评价第51-55页
    4.1 材料与方法第51-52页
        4.1.1 实验动物第51页
        4.1.2 主要试剂第51页
        4.1.3 疫苗制备与免疫第51-52页
        4.1.4 猪圆环病毒2型(PCV 2)IgG抗体检测第52页
    4.2 结果与分析第52-53页
    4.3 讨论第53-55页
第5章 总结与展望第55-57页
    5.1 全文总结第55页
    5.2 展望第55-57页
参考文献第57-66页
硕士在读期间发表论文第66-67页
致谢第67页

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