嗜盐纤维素酶CelB底物识别位点的定点突变研究
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 绪论 | 第8-20页 |
| 1.1 纤维素与木质生物质 | 第8-10页 |
| 1.2 纤维素酶 | 第10-16页 |
| 1.3 纤维素酶基因的克隆表达 | 第16-17页 |
| 1.4 蛋白质晶体学 | 第17-18页 |
| 1.5 研究背景及目的意义 | 第18-19页 |
| 1.6 技术路线 | 第19-20页 |
| 2 实验材料与仪器 | 第20-24页 |
| 2.1 实验菌株及质粒 | 第20页 |
| 2.2 培养基的配制 | 第20页 |
| 2.3 生化试剂 | 第20-21页 |
| 2.4 试剂盒及工具酶 | 第21页 |
| 2.5 实验仪器设备 | 第21页 |
| 2.6 实验室常用溶液的配制 | 第21-24页 |
| 3 实验方法 | 第24-33页 |
| 3.1 基因克隆 | 第24-29页 |
| 3.2 蛋白质的表达纯化 | 第29-30页 |
| 3.3 蛋白质的检测 | 第30-31页 |
| 3.4 纤维素酶酶活力的测定 | 第31-32页 |
| 3.5 动态光散射法 | 第32页 |
| 3.6 嗜盐纤维素酶CelB与底物的共结晶 | 第32-33页 |
| 4 实验结果与分析 | 第33-51页 |
| 4.1 嗜盐纤维素酶CelB的序列分析 | 第33-36页 |
| 4.2 嗜盐纤维素酶CelB整体结构的基本分析 | 第36-37页 |
| 4.3 嗜盐纤维素酶CelB突变型基因的克隆 | 第37-39页 |
| 4.4 纤维素酶的表达纯化 | 第39-41页 |
| 4.5 蛋白质检测 | 第41-43页 |
| 4.6 纤维素酶活力的测定 | 第43-47页 |
| 4.7 蛋白质结晶 | 第47-51页 |
| 5 讨论 | 第51-53页 |
| 5.1 野生型分析 | 第51页 |
| 5.2 定点突变分析 | 第51-52页 |
| 5.3 蛋白质晶体分析 | 第52-53页 |
| 6 总结与展望 | 第53-54页 |
| 6.1 全文总结 | 第53页 |
| 6.2 研究展望 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附录1 英文缩略词表 | 第61-62页 |
| 附录2 定点突变的引物设计表 | 第62-64页 |
| 附录3 质粒图谱 | 第64-65页 |
| 附录4 蛋白质稳定性检验图 | 第65页 |
