| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第1章 绪论 | 第15-31页 |
| 1.1 课题研究背景及意义 | 第15页 |
| 1.2 miRNAs概述 | 第15-19页 |
| 1.2.1 miRNAs的形成和作用机制 | 第15-17页 |
| 1.2.2 miRNAs的预测与靶基因的验证 | 第17-19页 |
| 1.3 miRNAs与动物发育 | 第19-23页 |
| 1.3.1 miRNAs对胚胎发育的影响 | 第19-21页 |
| 1.3.2 miRNAs对胎盘的影响 | 第21-23页 |
| 1.4 miRNAs在癌症中的功能 | 第23-25页 |
| 1.4.1 原癌miRNAs | 第23-24页 |
| 1.4.2 肿瘤抑制性miRNAs | 第24-25页 |
| 1.5 Dlk1-Dio3印记区 | 第25-29页 |
| 1.5.1 D1k1-Dio3内功能元件 | 第25-27页 |
| 1.5.2 D1k1-Dio3内miRNAs | 第27-29页 |
| 1.6 本论文的主要研究内容及技术路线 | 第29-31页 |
| 1.6.1 研究内容 | 第29-30页 |
| 1.6.2 技术路线 | 第30-31页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第31-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-34页 |
| 2.1.1 实验动物和细胞系 | 第31页 |
| 2.1.2 实验试剂和仪器 | 第31-33页 |
| 2.1.3 常用网站和软件 | 第33-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-44页 |
| 2.2.1 核酸的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.2 miRNA探针的制备 | 第35-36页 |
| 2.2.3 原位杂交 | 第36-37页 |
| 2.2.4 慢病毒载体的构建 | 第37-39页 |
| 2.2.5 miRNA定量PCR | 第39-40页 |
| 2.2.6 靶基因的构建及双荧光素酶的检测 | 第40-41页 |
| 2.2.7 Western Blot | 第41页 |
| 2.2.8 免疫细胞化学 | 第41-42页 |
| 2.2.9 流式细胞仪 | 第42页 |
| 2.2.10 细胞侵袭和迁移 | 第42-43页 |
| 2.2.11 小动物活体成像 | 第43页 |
| 2.2.12 裸鼠成瘤 | 第43页 |
| 2.2.13 统计学分析 | 第43-44页 |
| 第3章 miR-1188的表达谱分析 | 第44-56页 |
| 3.1 引言 | 第44页 |
| 3.2 miR-1188的生物信息学分析 | 第44-47页 |
| 3.3 miR-1188在小鼠胚胎中的表达模式 | 第47-53页 |
| 3.3.1 miR-1188在胚胎发育中的定量分析 | 第47-51页 |
| 3.3.2 miR-1188在胚胎发育中的原位分析 | 第51-53页 |
| 3.4 miR-1188在小鼠肿瘤细胞系内的表达分析 | 第53-54页 |
| 3.5 本章小结 | 第54-56页 |
| 第4章 过表达miR-1188对小鼠胚胎发育的影响 | 第56-80页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 过表达miR-1188慢病毒载体的构建及包装 | 第56-58页 |
| 4.2.1 慢病毒载体的构建及包装 | 第56-57页 |
| 4.2.2 病毒滴度测定 | 第57-58页 |
| 4.3 过表达miR-1188后对E15.5 天胚胎的表型分析 | 第58-68页 |
| 4.3.1 过表达miR-1188后胚胎荧光成像 | 第58-60页 |
| 4.3.2 小鼠胚胎数量及重量分析 | 第60-62页 |
| 4.3.3 过表达miR-1188后胚胎各脏器表达检测 | 第62-64页 |
| 4.3.4 过表达miR-1188后形态学分析 | 第64-68页 |
| 4.4 发育相关靶基因的鉴定及表达分析 | 第68-79页 |
| 4.4.1 靶基因的鉴定 | 第68-73页 |
| 4.4.2 靶基因的表达分析 | 第73-79页 |
| 4.5 本章小结 | 第79-80页 |
| 第5章 miR-1188对肝癌细胞Hepa1-6 生物学特性的影响 | 第80-105页 |
| 5.1 引言 | 第80页 |
| 5.2 miR-1188影响Hepa1-6 细胞增殖和克隆形成 | 第80-83页 |
| 5.3 miR-1188对Hepa1-6 细胞侵袭和迁移能力的影响 | 第83-86页 |
| 5.3.1 细胞形态的影响 | 第83-84页 |
| 5.3.2 侵袭和迁移能力的影响 | 第84-86页 |
| 5.4 miR-1188对Hepa1-6 细胞凋亡的影响 | 第86-88页 |
| 5.4.1 miR-1188对Caspase-3 活性的影响 | 第86-87页 |
| 5.4.2 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第87-88页 |
| 5.5 miR-1188抑制靶基因的表达影响Hepa1-6 的生物学行为 | 第88-100页 |
| 5.5.1 miR-1188靶向抑制Bcl-2 影响细胞凋亡 | 第89-95页 |
| 5.5.2 miR-1188靶向抑制Sp1影响细胞侵袭 | 第95-100页 |
| 5.6 miR-1188对体内成瘤的影响 | 第100-104页 |
| 5.7 本章小结 | 第104-105页 |
| 结论 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-126页 |
| 附录Ⅰ | 第126-130页 |
| 附录Ⅱ | 第130-132页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文及其它成果 | 第132-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
| 个人简历 | 第136页 |
