| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 课题的提出 | 第11-12页 |
| 1.2 柑橘果实有机酸代谢调控研究 | 第12-14页 |
| 1.3 GABA代谢研究 | 第14-18页 |
| 1.3.1 GABA功能 | 第14-16页 |
| 1.3.2 GABA代谢途径 | 第16-17页 |
| 1.3.3 GABA代谢调控 | 第17-18页 |
| 1.4 启动子与转录因子互作研究 | 第18-20页 |
| 1.4.1 启动子研究 | 第18-19页 |
| 1.4.2 转录因子研究 | 第19页 |
| 1.4.3 酵母单杂交 | 第19-20页 |
| 1.5 研究目的与内容 | 第20-21页 |
| 2 实验材料和方法 | 第21-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第21页 |
| 2.1.3 工具酶及主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 酵母培养基及溶液配方 | 第22页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-35页 |
| 2.2.1 HB柚和无酸柚基因组DNA提取 | 第23页 |
| 2.2.2 CsGABP基因组全长gDNA、ORF区及启动子序列克隆 | 第23-25页 |
| 2.2.3 生物信息学分析 | 第25页 |
| 2.2.4 qRT-PCR验证共表达的转录因子 | 第25-28页 |
| 2.2.5 载体构建 | 第28-32页 |
| 2.2.6 诱饵酵母菌株构建 | 第32-33页 |
| 2.2.7 筛选cDNA文库 | 第33页 |
| 2.2.8 酵母单杂点对点验证 | 第33-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-59页 |
| 3.1 CsGABP基因及启动子克隆 | 第35-41页 |
| 3.1.1 CsGABP基因组全长gDNA、ORF区 | 第35-39页 |
| 3.1.2 CsGABP基因启动子克隆 | 第39-41页 |
| 3.2 CsGABP-a基因启动子顺式作用元件预测 | 第41-42页 |
| 3.3 转录组数据筛选候选基因 | 第42-44页 |
| 3.4 qRT-PCR验证共表达转录因子 | 第44-47页 |
| 3.5 诱饵载体pBait-AbAi构建 | 第47-50页 |
| 3.5.1 元件诱饵载体构建 | 第47-48页 |
| 3.5.2 片段诱饵载体构建 | 第48-50页 |
| 3.6 诱饵酵母菌株构建 | 第50-54页 |
| 3.6.1 诱饵载体转化Y1H Gold酵母 | 第50-52页 |
| 3.6.2 诱饵酵母背景表达水平检测 | 第52-54页 |
| 3.7 cDNA文库筛选 | 第54-55页 |
| 3.8 猎物载体AD-Prey构建 | 第55-56页 |
| 3.9 酵母单杂点对点验证 | 第56-59页 |
| 3.9.1 AD-Prey载体质粒转化诱饵酵母 | 第56-57页 |
| 3.9.2 AD-Prey载体质粒转化诱饵酵母阳性克隆鉴定 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-65页 |
| 4.1 酵母单杂交体系探讨 | 第59-60页 |
| 4.2 筛选的转录因子结合位点探讨 | 第60-61页 |
| 4.3 筛选转录因子在采后柑橘中功能探讨 | 第61-63页 |
| 4.4 展望 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-75页 |
| 附录I 酵母转化方法 | 第75-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
