| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 引言 | 第14-27页 |
| 0.1 概述 | 第14-15页 |
| 0.2 抗菌肽的主要特征 | 第15-18页 |
| 0.2.1 一般特征 | 第15-16页 |
| 0.2.2 抗菌肽的分类及结构特点 | 第16-18页 |
| 0.3 抗菌肽的作用机制 | 第18-19页 |
| 0.3.1 抗菌肽作用机制研究 | 第18-19页 |
| 0.3.2 对正常的真核细胞无作用的原因 | 第19页 |
| 0.4 抗菌肽的生物学活性 | 第19-21页 |
| 0.4.1 抗菌肽对细菌的作用 | 第19-20页 |
| 0.4.2 抗菌肽对病毒的作用 | 第20页 |
| 0.4.3 抗菌肽对真菌的作用 | 第20页 |
| 0.4.4 抗菌肽对某些原生动物的抑制作用 | 第20-21页 |
| 0.4.5 抗菌肽对抑制肿瘤细胞的作用 | 第21页 |
| 0.4.6 抗菌肽的其它生物学功能 | 第21页 |
| 0.5 抗菌肽的应用前景 | 第21-23页 |
| 0.5.1 药用前景 | 第22页 |
| 0.5.2 食品工业应用前景 | 第22页 |
| 0.5.3 农业工程应用前景 | 第22-23页 |
| 0.5.4 畜牧水产养殖业应用前景 | 第23页 |
| 0.6 抗菌肽基因工程表达策略 | 第23-25页 |
| 0.6.1 原核表达的优势 | 第23-24页 |
| 0.6.1.1 大肠杆菌表达系统 | 第24页 |
| 0.6.1.2 pET表达系统 | 第24页 |
| 0.6.2 抗菌肽的原核表达策略 | 第24-25页 |
| 0.6.2.1 密码子偏爱性 | 第25页 |
| 0.6.2.2 串联表达 | 第25页 |
| 0.6.2.3 融合表达 | 第25页 |
| 0.7 本文目的与意义 | 第25-27页 |
| 第1章 Dybowskin-2CDYa原核融合表达载体的构建 | 第27-46页 |
| 1.1 引言 | 第27-28页 |
| 1.2 实验材料 | 第28-30页 |
| 1.2.1 菌株、质粒 | 第28页 |
| 1.2.2 实验试剂 | 第28页 |
| 1.2.3 主要仪器 | 第28-29页 |
| 1.2.4 溶液与培养基的配制 | 第29-30页 |
| 1.3 实验方法 | 第30-39页 |
| 1.3.1 实验策略 | 第30-31页 |
| 1.3.2 融合多肽基因序列设计 | 第31-32页 |
| 1.3.3 引物设计 | 第32-33页 |
| 1.3.4 SOE-PCR法扩增融合多肽基因序列 | 第33-35页 |
| 1.3.5 重组表达质粒的构建 | 第35-39页 |
| 1.3.5.1 粘性末端的制备 | 第35-36页 |
| 1.3.5.2 酶切产物的连接 | 第36-37页 |
| 1.3.5.3 大肠杆菌JM109感受态细胞的制备 | 第37页 |
| 1.3.5.4 重组质粒的转化 | 第37-38页 |
| 1.3.5.5 阳性重组子的筛选 | 第38-39页 |
| 1.3.5.6 重组质粒的制备 | 第39页 |
| 1.3.5.7 阳性重组质粒的测序与分析 | 第39页 |
| 1.4 结果 | 第39-43页 |
| 1.4.1 融合肽基因序列的获得 | 第40-41页 |
| 1.4.2 粘性末端的制备结果 | 第41页 |
| 1.4.3 阳性重组质粒的PCR鉴定结果 | 第41-42页 |
| 1.4.4 阳性重组质粒的测序结果 | 第42-43页 |
| 1.5 讨论 | 第43-46页 |
| 第2章 Dybowskin-2CDYa融合蛋白的原核表达系统的构建和活性研究 | 第46-62页 |
| 2.1 引言 | 第46页 |
| 2.2 实验材料 | 第46-50页 |
| 2.2.1 菌株、质粒 | 第46页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第46页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第46-47页 |
| 2.2.4 溶液与培养基的配制 | 第47-50页 |
| 2.3 实验方法 | 第50-54页 |
| 2.3.1 重组质粒的制备 | 第50页 |
| 2.3.2 重组质粒的转化 | 第50页 |
| 2.3.3 转化菌株的PCR鉴定 | 第50-51页 |
| 2.3.4 阳性重组了的摇瓶诱导 | 第51页 |
| 2.3.5 诱导产物的SDS-PAGE分析 | 第51-52页 |
| 2.3.6 表达产物的Western Blot鉴定 | 第52页 |
| 2.3.7 融合蛋白的分离纯化 | 第52-53页 |
| 2.3.7.1 包涵体的破碎与融合蛋白的表达分析 | 第52页 |
| 2.3.7.2 包涵体的洗涤和溶解 | 第52-53页 |
| 2.3.7.3 镍离子亲和层析分离纯化 | 第53页 |
| 2.3.8 纯化蛋白的复性和活性检测 | 第53-54页 |
| 2.3.8.1 纯化蛋白的透析 | 第53页 |
| 2.3.8.2 纯化产物的活性检测 | 第53-54页 |
| 2.4 结果 | 第54-60页 |
| 2.4.1 重组质粒的制备 | 第54-55页 |
| 2.4.2 重组质粒转化BL21的PCR验证 | 第55-56页 |
| 2.4.3 诱导产物的SDS-PAGE分析 | 第56页 |
| 2.4.4 表达产物的Western Blot | 第56-57页 |
| 2.4.5 融合蛋白的表达方式 | 第57页 |
| 2.4.6 纯化产物的SDS-PAGE分析 | 第57-58页 |
| 2.4.7 纯化产物的活性检测 | 第58-60页 |
| 2.5 讨论 | 第60-62页 |
| 第3章 结论 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况 | 第68页 |
