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PCG6在稻瘟病菌生长发育和致病过程中的作用及机理研究

摘要第4-6页
ABSTRACT第6-7页
英文缩略词第11-13页
第一章 绪论第13-34页
    1. 人口增长与粮食安全第13-14页
    2. 稻瘟病的危害与稻瘟病菌的侵染特征第14-16页
    3. 稻瘟病菌致病机理研究进展第16-25页
        3.1. 分生孢子的产生与传播第16-18页
        3.2. 侵染前的准备与附着胞的形成第18-20页
        3.3. 附着胞形成过程中的信号事件第20-22页
        3.4. 次级代谢和对宿主的定殖第22页
        3.5. 分泌系统与效应因子第22-24页
        3.6. 在寄主细胞内定殖与生长第24-25页
    4. 转录后调控与RNA结合蛋白第25-31页
        4.1 RNA结合蛋白的结构和功能第25-29页
        4.2 含KH结构域蛋白的结构和功能第29-31页
    5. 谷氨酸的合成与代谢第31-32页
    6. 本论文的主要研究内容和意义第32-34页
第二章 KH结构域蛋白PCG6的结构与功能分析第34-61页
    2.1 材料与方法第34-46页
        2.1.1 真菌材料与培养条件第34-35页
        2.1.2 生长缓慢突变体的筛选第35页
        2.1.3 共分离分析和插入位点数验证第35-37页
        2.1.4 TAIL-PCR和基因功能预测第37-38页
        2.1.5 突变体的互补第38-41页
        2.1.6 PCG6基因敲除与转化子验证第41-43页
        2.1.7 亚细胞定位载体的构建和转化第43-44页
        2.1.8 菌丝生长表型测定第44页
        2.1.9 产孢量测定和孢子形态观察第44-45页
        2.1.10 侵染过程观察第45-46页
        2.1.11 致病性测定第46页
    2.2 结果与分析第46-59页
        2.2.1 PCG6基因的分离与鉴定第47-48页
        2.2.2 PCG6的敲除与验证第48-49页
        2.2.3 Pcg6蛋白的结构分析与功能预测第49-50页
        2.2.4 Pcg6的亚细胞定位与融合表达第50-52页
        2.2.5 PCG6有助于菌丝的正常生长第52-53页
        2.2.6 PCG6影响分生孢子的形态和产量第53-55页
        2.2.7 PCG6对稻瘟病菌致病性的影响第55-56页
        2.2.8 PCG6对稻瘟病菌侵染过程的影响第56-59页
    2.3 本章小结第59-61页
第三章 PCG6作用模式和调控机理研究第61-89页
    3.1 材料与方法第61-75页
        3.1.1 Pcg6蛋白表达载体的构建与Pcg6蛋白的分离纯化第61-65页
        3.1.2 Pcg6蛋白与目标基序AUACC的体外结合试验第65-67页
        3.1.3 总RNA提取和转录组测序分析第67页
        3.1.4 Pcg6调控基因的qRT-PCR验证第67-73页
        3.1.5 cAMP和IBMX处理对Pcg6敲除体附着胞形成与菌丝侵染的影响第73页
        3.1.6 MGG_08074、MGG_14279和MGG_07187超表达载体的构建与超表达体的表型分析第73-74页
        3.1.7 HPLC法测定稻瘟菌中谷氨酸和谷氨酰胺的含量第74-75页
    3.2 结果与分析第75-88页
        3.2.1 高通量RNA测序的转录谱分析第75-78页
        3.2.2 Pcg6蛋白识别MoGlt1的5'非翻译区和3'非翻译区的'AUACC'基序第78-81页
        3.2.3 谷氨酸代谢路径中受Pcg6负调控基因的功能分析第81-85页
        3.2.4 Pcg6蛋白正调控参与稻瘟病菌cAMP信号路径的致病相关基因第85-88页
    3.3 本章小结第88-89页
第四章 受PCG6调控基因MOGLT1的功能分析第89-107页
    4.1 材料与方法第89-91页
        4.1.1 真菌菌株与生长条件第89页
        4.1.2 核酸操作方法第89-90页
        4.1.3 生物信息学分析第90页
        4.1.4 MoGLT1基因的敲除与互补第90-91页
        4.1.5 显微观察试验第91页
        4.1.6 致病性试验第91页
        4.1.7 高效液相色谱(HPLC)分析第91页
    4.2 结果与分析第91-101页
        4.2.1 MoGLT1的分离与克隆第91-93页
        4.2.2 MoGLT1对于分生孢子的形成是必需的第93-95页
        4.2.3 MoGLT1有助于稻瘟菌对寄主的致病第95-97页
        4.2.4 MoGLT1基因参与了菌体内谷氨酸的积累第97-99页
        4.2.5 外源添加谷氨酸能够恢复ΔMoglt1缺失突变体的生长、产孢和致病性第99-101页
    4.3 本章小结第101-107页
第五章 结论与讨论第107-111页
参考文献第111-119页
致谢第119-122页
作者简介第122-123页

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