摘要 | 第4-6页 |
ABSTRACT | 第6-7页 |
英文缩略词 | 第11-13页 |
第一章 绪论 | 第13-34页 |
1. 人口增长与粮食安全 | 第13-14页 |
2. 稻瘟病的危害与稻瘟病菌的侵染特征 | 第14-16页 |
3. 稻瘟病菌致病机理研究进展 | 第16-25页 |
3.1. 分生孢子的产生与传播 | 第16-18页 |
3.2. 侵染前的准备与附着胞的形成 | 第18-20页 |
3.3. 附着胞形成过程中的信号事件 | 第20-22页 |
3.4. 次级代谢和对宿主的定殖 | 第22页 |
3.5. 分泌系统与效应因子 | 第22-24页 |
3.6. 在寄主细胞内定殖与生长 | 第24-25页 |
4. 转录后调控与RNA结合蛋白 | 第25-31页 |
4.1 RNA结合蛋白的结构和功能 | 第25-29页 |
4.2 含KH结构域蛋白的结构和功能 | 第29-31页 |
5. 谷氨酸的合成与代谢 | 第31-32页 |
6. 本论文的主要研究内容和意义 | 第32-34页 |
第二章 KH结构域蛋白PCG6的结构与功能分析 | 第34-61页 |
2.1 材料与方法 | 第34-46页 |
2.1.1 真菌材料与培养条件 | 第34-35页 |
2.1.2 生长缓慢突变体的筛选 | 第35页 |
2.1.3 共分离分析和插入位点数验证 | 第35-37页 |
2.1.4 TAIL-PCR和基因功能预测 | 第37-38页 |
2.1.5 突变体的互补 | 第38-41页 |
2.1.6 PCG6基因敲除与转化子验证 | 第41-43页 |
2.1.7 亚细胞定位载体的构建和转化 | 第43-44页 |
2.1.8 菌丝生长表型测定 | 第44页 |
2.1.9 产孢量测定和孢子形态观察 | 第44-45页 |
2.1.10 侵染过程观察 | 第45-46页 |
2.1.11 致病性测定 | 第46页 |
2.2 结果与分析 | 第46-59页 |
2.2.1 PCG6基因的分离与鉴定 | 第47-48页 |
2.2.2 PCG6的敲除与验证 | 第48-49页 |
2.2.3 Pcg6蛋白的结构分析与功能预测 | 第49-50页 |
2.2.4 Pcg6的亚细胞定位与融合表达 | 第50-52页 |
2.2.5 PCG6有助于菌丝的正常生长 | 第52-53页 |
2.2.6 PCG6影响分生孢子的形态和产量 | 第53-55页 |
2.2.7 PCG6对稻瘟病菌致病性的影响 | 第55-56页 |
2.2.8 PCG6对稻瘟病菌侵染过程的影响 | 第56-59页 |
2.3 本章小结 | 第59-61页 |
第三章 PCG6作用模式和调控机理研究 | 第61-89页 |
3.1 材料与方法 | 第61-75页 |
3.1.1 Pcg6蛋白表达载体的构建与Pcg6蛋白的分离纯化 | 第61-65页 |
3.1.2 Pcg6蛋白与目标基序AUACC的体外结合试验 | 第65-67页 |
3.1.3 总RNA提取和转录组测序分析 | 第67页 |
3.1.4 Pcg6调控基因的qRT-PCR验证 | 第67-73页 |
3.1.5 cAMP和IBMX处理对Pcg6敲除体附着胞形成与菌丝侵染的影响 | 第73页 |
3.1.6 MGG_08074、MGG_14279和MGG_07187超表达载体的构建与超表达体的表型分析 | 第73-74页 |
3.1.7 HPLC法测定稻瘟菌中谷氨酸和谷氨酰胺的含量 | 第74-75页 |
3.2 结果与分析 | 第75-88页 |
3.2.1 高通量RNA测序的转录谱分析 | 第75-78页 |
3.2.2 Pcg6蛋白识别MoGlt1的5'非翻译区和3'非翻译区的'AUACC'基序 | 第78-81页 |
3.2.3 谷氨酸代谢路径中受Pcg6负调控基因的功能分析 | 第81-85页 |
3.2.4 Pcg6蛋白正调控参与稻瘟病菌cAMP信号路径的致病相关基因 | 第85-88页 |
3.3 本章小结 | 第88-89页 |
第四章 受PCG6调控基因MOGLT1的功能分析 | 第89-107页 |
4.1 材料与方法 | 第89-91页 |
4.1.1 真菌菌株与生长条件 | 第89页 |
4.1.2 核酸操作方法 | 第89-90页 |
4.1.3 生物信息学分析 | 第90页 |
4.1.4 MoGLT1基因的敲除与互补 | 第90-91页 |
4.1.5 显微观察试验 | 第91页 |
4.1.6 致病性试验 | 第91页 |
4.1.7 高效液相色谱(HPLC)分析 | 第91页 |
4.2 结果与分析 | 第91-101页 |
4.2.1 MoGLT1的分离与克隆 | 第91-93页 |
4.2.2 MoGLT1对于分生孢子的形成是必需的 | 第93-95页 |
4.2.3 MoGLT1有助于稻瘟菌对寄主的致病 | 第95-97页 |
4.2.4 MoGLT1基因参与了菌体内谷氨酸的积累 | 第97-99页 |
4.2.5 外源添加谷氨酸能够恢复ΔMoglt1缺失突变体的生长、产孢和致病性 | 第99-101页 |
4.3 本章小结 | 第101-107页 |
第五章 结论与讨论 | 第107-111页 |
参考文献 | 第111-119页 |
致谢 | 第119-122页 |
作者简介 | 第122-123页 |