| 中文摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-17页 |
| 1.1 斑马鱼作为模式生物的优势 | 第10-11页 |
| 1.2 生物钟概述及其分子机制 | 第11-13页 |
| 1.3 生物种基因的转录后调控 | 第13-14页 |
| 1.4 miRNA的产生和作用 | 第14-15页 |
| 1.5 miRNA对生物钟基因的调控 | 第15-16页 |
| 1.6 关于miR-148 的研究及立题意义 | 第16-17页 |
| 第二章 材料和方法 | 第17-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第17页 |
| 2.2 实验仪器 | 第17-18页 |
| 2.3 实验试剂 | 第18-19页 |
| 2.4 常用试剂配制 | 第19-21页 |
| 2.4.1 细菌培养基 | 第19-20页 |
| 2.4.2 抗生素 | 第20页 |
| 2.4.3 核酸电泳缓冲液 | 第20页 |
| 2.4.4 原位杂交相关试剂 | 第20-21页 |
| 2.4.5 Inoue法制备超级感受态细胞相关溶液配制 | 第21页 |
| 2.4.6 其它溶液 | 第21页 |
| 2.5 引物设计及合成 | 第21-23页 |
| 2.6 实验方法及设计 | 第23-38页 |
| 2.6.1 斑马鱼交配及产卵 | 第23-24页 |
| 2.6.2 斑马鱼基因组DNA的提取 | 第24页 |
| 2.6.3 PCR扩增目的片段 | 第24-25页 |
| 2.6.4 胶回收 | 第25页 |
| 2.6.5 目的片段连接载体及酶切鉴定 | 第25-26页 |
| 2.6.6 斑马鱼胚胎Total RNA的提取 | 第26页 |
| 2.6.7 mRNA反转为cDNA | 第26-27页 |
| 2.6.8 microRNA反转成cDNA | 第27页 |
| 2.6.9 定量PCR以及溶解曲线的测定 | 第27-28页 |
| 2.6.10 感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 2.6.11 转化 | 第28-29页 |
| 2.6.12 转化实验重组体的PCR鉴定 | 第29页 |
| 2.6.13 提取质粒（试剂盒） | 第29-30页 |
| 2.6.14 原位杂交 | 第30-31页 |
| 2.6.15 ChIP | 第31-33页 |
| 2.6.16 斑马鱼行为 | 第33页 |
| 2.6.17 细胞实验 | 第33-34页 |
| 2.6.18 利用CRISPR-Cas9构建miR-148 斑马鱼突变体 | 第34-35页 |
| 2.6.19 clock1a转基因鱼的构建及筛选 | 第35-36页 |
| 2.6.19.1 clock1a-GFP 转基因鱼的筛选 | 第35-36页 |
| 2.6.19.2 clock1a-Luciferase 转基因鱼的筛选 | 第36页 |
| 2.6.19.3 miR148mCherry转基因鱼的筛选 | 第36页 |
| 2.6.20 miR-148 过表达转基因鱼构建 | 第36-37页 |
| 2.6.21 数据统计分析 | 第37-38页 |
| 第三章 实验结果及分析 | 第38-69页 |
| 3.1 斑马鱼生物钟基因clock1a受生物钟的调控 | 第38-41页 |
| 3.1.1 斑马鱼生物种基因clock1a受到生物钟调控 | 第38-41页 |
| 3.1.2 原位杂交试验确定基因表达的位置 | 第41页 |
| 3.2 miRNA影响斑马鱼生物钟 | 第41-43页 |
| 3.3 miR-148 通过绑定clock1a 3’ UTR下调其mRNA水平 | 第43-50页 |
| 3.3.1 clock1a 3’ UTR区域可能存在miR-148 的靶位点 | 第43-44页 |
| 3.3.2 miR-148 在斑马鱼体内是振荡表达的 | 第44-47页 |
| 3.3.3 miR-148 可以抑制clock1a 3’ UTR的活性 | 第47-50页 |
| 3.4 利用CRISPR-Cas9技术构建斑马鱼miR-148 基因的突变体 | 第50-54页 |
| 3.4.1 CRISPR-Cas9靶位点的设计 | 第50-53页 |
| 3.4.2 miR-148 纯合突变体的筛选 | 第53-54页 |
| 3.5 斑马鱼miR-148 纯合突变体中clock1a表达的变化 | 第54-56页 |
| 3.6 斑马鱼miR-148 突变体行为节律发生改变 | 第56-59页 |
| 3.7 拯救实验 | 第59-62页 |
| 3.7.1 通过注射miR-148 类似物进行拯救实验 | 第59-60页 |
| 3.7.2 构建miR-148 过表达转基因斑马鱼 | 第60-62页 |
| 3.8 在转录水平miR-148 可以间接调节clock1a的表达 | 第62-66页 |
| 3.8.1 斑马鱼生物种基因clock1a受到胰岛素通路Fox O3信号的调控 | 第62-64页 |
| 3.8.2 在转录水平mi R-148 可以通过Zic1-FoxO3a通路间接调控clock1a的表达 | 第64-66页 |
| 3.9 斑马鱼生物钟基因clock1a在转录水平和转录后水平水平受到的调控 | 第66页 |
| 3.10 miR-148 突变体转录组测序分析 | 第66-69页 |
| 第四章 讨论和展望 | 第69-75页 |
| 4.1 斑马鱼miR-148 突变体的建立 | 第69页 |
| 4.2 研究生物钟的意义 | 第69-70页 |
| 4.3 Clock在不同模式生物中存在不同的调节方式 | 第70页 |
| 4.4 miR-148 与生物钟之间的相互影响 | 第70-71页 |
| 4.5 miR-148 在斑马鱼生长发育中起重要作用 | 第71-75页 |
| 第五章 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-86页 |
| 附录 缩略词表 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
