| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略词 | 第7-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-29页 |
| 1.1 结直肠癌流行病学 | 第14-15页 |
| 1.2 肿瘤多药耐药 | 第15-17页 |
| 1.2.1 多药耐药机制 | 第15-17页 |
| 1.3 肿瘤中钙信号研究进展 | 第17-19页 |
| 1.3.1 疾病中钙信号的变化 | 第17-18页 |
| 1.3.2 肿瘤细胞中钙信号的变化 | 第18-19页 |
| 1.4 Wnt信号通路 | 第19-22页 |
| 1.4.1 Wnt信号通路概述 | 第19-20页 |
| 1.4.2 Wnt通路的异常与肿瘤 | 第20-22页 |
| 1.5 瞬时受体电位离子通道 | 第22-26页 |
| 1.5.1 Trp简要概述 | 第22-23页 |
| 1.5.2 Trp与疾病 | 第23-25页 |
| 1.5.3 TrpC5在癌症中的研究进展 | 第25-26页 |
| 1.6 本论文的主要研究内容 | 第26-29页 |
| 1.6.1 研究意义 | 第26页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第26-29页 |
| 第二章 TrpC5与结直肠癌分化程度相关性研究 | 第29-54页 |
| 2.1 前言 | 第29-30页 |
| 2.2 实验材料 | 第30-32页 |
| 2.2.1 结直肠癌新鲜组织标本 | 第30页 |
| 2.2.2 结直肠癌石蜡组织标本 | 第30页 |
| 2.2.3 细胞株 | 第30页 |
| 2.2.4 试剂 | 第30-31页 |
| 2.2.5 仪器 | 第31-32页 |
| 2.2.6 引物 | 第32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-39页 |
| 2.3.1 组织RNA提取 | 第32-33页 |
| 2.3.2 反转录PCR（Reverse Transcription-PCR，RT-PCR） | 第33页 |
| 2.3.3 组织蛋白提取 | 第33页 |
| 2.3.4 蛋白浓度测定（BCA定量试剂盒） | 第33页 |
| 2.3.5 蛋白质免疫印迹 (Western Blot, WB) | 第33-34页 |
| 2.3.6 石蜡切片制备 | 第34-35页 |
| 2.3.7 免疫组化 | 第35-36页 |
| 2.3.8 组织切片HE染色 | 第36页 |
| 2.3.9 原代细胞培养 | 第36页 |
| 2.3.10 细胞培养 | 第36页 |
| 2.3.11 细胞免疫荧光染色 | 第36-37页 |
| 2.3.12 胞内游离钙离子浓度测定 | 第37页 |
| 2.3.13 细胞RNA提取 | 第37页 |
| 2.3.14 细胞蛋白提取 | 第37-38页 |
| 2.3.15 质粒转化 | 第38页 |
| 2.3.16 质粒提取 | 第38页 |
| 2.3.17 细胞转染 | 第38-39页 |
| 2.4 结果 | 第39-51页 |
| 2.4.1 TrpC家族在临床结直肠癌组织中转录水平表达分析 | 第39-41页 |
| 2.4.2 TrpC5抗体特异性评估 | 第41页 |
| 2.4.3 TrpC5在临床结直肠癌组织中蛋白表达水平分析 | 第41-42页 |
| 2.4.4 结直肠癌组织中TrpC5的表达与分化程度相关 | 第42-44页 |
| 2.4.5 结直肠癌原代细胞中TrpC5的表达与分化相关 | 第44-45页 |
| 2.4.6 结直肠癌细胞株TrpC5和分化标志物的mRNA表达水平分析 | 第45-46页 |
| 2.4.7 不同分化水平的结直肠癌细胞株TrpC5的蛋白表达水平分析 | 第46-47页 |
| 2.4.8 小RNA沉默低分化细胞TrpC5的蛋白水平分析 | 第47页 |
| 2.4.9 小RNA沉默低分化细胞TrpC5的功能水平分析 | 第47-48页 |
| 2.4.10 TrpC5-siRNA沉默低分化细胞后分化标志物的mRNA表达水平分析 | 第48-49页 |
| 2.4.11 高分化细胞转染过表达质粒后TrpC5蛋白水平分析 | 第49-50页 |
| 2.4.12 高分化细胞转染过表达质粒后TrpC5的功能水平分析 | 第50-51页 |
| 2.4.13 高分化细胞转染过表达质粒后分化标志物的mRNA表达水平分析 | 第51页 |
| 2.5 讨论 | 第51-52页 |
| 2.6 本章小结 | 第52-54页 |
| 第三章 TrpC5调控分化的分子机制研究 | 第54-66页 |
| 3.1 前言 | 第54页 |
| 3.2 实验材料 | 第54-56页 |
| 3.2.1 临床标本新鲜组织 | 第54-55页 |
| 3.2.2 试剂 | 第55页 |
| 3.2.3 仪器 | 第55页 |
| 3.2.4 引物 | 第55-56页 |
| 3.3 实验方法 | 第56-57页 |
| 3.3.1 细胞RNA提取 | 第56页 |
| 3.3.2 RT-PCR | 第56页 |
| 3.3.3 细胞免疫荧光染色 | 第56页 |
| 3.3.4 Elisa实验 | 第56页 |
| 3.3.5 免疫组化 | 第56页 |
| 3.3.6 细胞转染 | 第56-57页 |
| 3.4 结果 | 第57-64页 |
| 3.4.1 RT-PCR分析结直肠癌细胞株中不同Wnt配体的表达情况 | 第57-59页 |
| 3.4.2 免疫荧光检测减少TrpC5表达后Wnt通路主要蛋白的表达情况 | 第59-60页 |
| 3.4.3 免疫荧光检测增加TrpC5表达后Wnt通路主要蛋白的表达情况 | 第60-61页 |
| 3.4.4 Elisa实验分析抑制TrpC5表达后细胞Wnt5a分泌情况 | 第61-62页 |
| 3.4.5 Elisa实验分析增加TrpC5表达后细胞Wnt5a分泌情况 | 第62页 |
| 3.4.6 不同分化程度的临床组织标本TrpC5及Wnt5a的表达分析 | 第62-64页 |
| 3.4.7 患者组织标本TrpC5的表达水平与血液中Wnt5a含量的相关性分析 | 第64页 |
| 3.5 讨论 | 第64-65页 |
| 3.6 本章小结 | 第65-66页 |
| 第四章 TrpC5通过调节分化影响药物治疗敏感性 | 第66-84页 |
| 4.1 前言 | 第66-67页 |
| 4.2 实验材料 | 第67-68页 |
| 4.2.1 临床标本新鲜组织 | 第67页 |
| 4.2.2 试剂 | 第67页 |
| 4.2.3 仪器 | 第67-68页 |
| 4.3 实验方法 | 第68-71页 |
| 4.3.1 细胞免疫荧光染色 | 第68页 |
| 4.3.2 流式细胞仪检测蛋白表达 | 第68页 |
| 4.3.3 成球实验 | 第68页 |
| 4.3.4 成瘤实验 | 第68页 |
| 4.3.5 石蜡组织切片制备 | 第68页 |
| 4.3.6 免疫组化 | 第68页 |
| 4.3.7 冰冻组织切片制备 | 第68-69页 |
| 4.3.8 冰冻组织免疫荧光染色 | 第69页 |
| 4.3.9 细胞RNA提取 | 第69页 |
| 4.3.10 荧光实时定量PCR（Real-time PCR） | 第69-70页 |
| 4.3.11 细胞蛋白提取 | 第70页 |
| 4.3.12 蛋白质免疫印迹 (Western Blot, WB) | 第70页 |
| 4.3.13 药物半抑制浓度IC50测定 | 第70-71页 |
| 4.4 结果 | 第71-82页 |
| 4.4.1 细胞免疫荧光检测抑制TrpC5表达后干性标志物的变化 | 第71页 |
| 4.4.2 流式细胞仪检测抑制TrpC5表达后干性标志物的变化 | 第71-72页 |
| 4.4.3 细胞免疫荧光检测过表达TrpC5后干性标志物的变化 | 第72-73页 |
| 4.4.4 流式细胞仪检测过表达TrpC5后干性标志物的变化 | 第73页 |
| 4.4.5 减少TrpC5表达对细胞体外成球能力影响的分析 | 第73-74页 |
| 4.4.6 增加TrpC5的表达对细胞体外成球能力影响的分析 | 第74-75页 |
| 4.4.7 体内成瘤实验分析抑制TrpC5表达对细胞干性能力的影响 | 第75页 |
| 4.4.8 体内成瘤实验分析增加TrpC5表达对细胞干性能力的影响 | 第75-76页 |
| 4.4.9 抑制TrpC5表达后移植瘤内分化标志物表达水平分析 | 第76-77页 |
| 4.4.10 增加TrpC5的表达后移植瘤内分化标志物的表达水平分析 | 第77-78页 |
| 4.4.11 Real-time PCR分析下调TrpC5表达后耐药蛋白P-gp转录表达水平 | 第78页 |
| 4.4.12 Real-time PCR分析上调TrpC5表达后耐药蛋白P-gp转录表达水平 | 第78-79页 |
| 4.4.13 Western bolt分析下调TrpC5表达后耐药蛋白P-gp翻译表达水平 | 第79页 |
| 4.4.14 Western blot分析上调TrpC5表达后耐药蛋白P-gp翻译表达水平 | 第79页 |
| 4.4.15 抑制TrpC5表达后细胞对化疗药物敏感性分析 | 第79-80页 |
| 4.4.16 增加TrpC5的表达后细胞对化疗药物敏感性分析 | 第80-81页 |
| 4.4.17 低分化结直肠癌患者耐药蛋白及干性标志物表达水平分析 | 第81页 |
| 4.4.18 高分化结直肠癌患者耐药蛋白及干性标志物表达水平分析 | 第81-82页 |
| 4.5 讨论 | 第82-83页 |
| 4.6 本章小结 | 第83-84页 |
| 第五章 TrpC5与药物治疗预后相关性研究 | 第84-89页 |
| 5.1 前言 | 第84页 |
| 5.2 实验材料 | 第84页 |
| 5.2.1 结直肠癌石蜡组织标本 | 第84页 |
| 5.3 实验方法 | 第84页 |
| 5.3.1 免疫组化 | 第84页 |
| 5.4 结果 | 第84-87页 |
| 5.4.1 TrpC5的表达水平与病人预后相关性分析 | 第84-85页 |
| 5.4.2 接受 5-Fu治疗的患者中TrpC5的表达水平与预后的关系 | 第85-86页 |
| 5.4.3 未接受 5-Fu治疗的患者中TrpC5的表达水平与预后的关系 | 第86-87页 |
| 5.5 讨论 | 第87-88页 |
| 5.6 本章小结 | 第88-89页 |
| 主要结论与展望 | 第89-91页 |
| 主要结论 | 第89-90页 |
| 展望 | 第90-91页 |
| 论文创新点 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-104页 |
| 附录 1: 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第104-106页 |
| 附录 2: 临床分析表格 | 第106-111页 |
