| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1.1 肝脏的结构、功能与药物作用 | 第13-16页 |
| 1.1.1 肝脏的结构 | 第13页 |
| 1.1.2 肝脏的功能 | 第13-14页 |
| 1.1.3 肝脏中的药物代谢、药理和毒副反应 | 第14-16页 |
| 1.2 肝细胞体外培养表达肝脏功能和反映药物作用 | 第16-18页 |
| 1.2.1 肝细胞体外培养方式 | 第16-17页 |
| 1.2.2 肝细胞体外培养的糖和脂肪代谢功能 | 第17页 |
| 1.2.3 肝细胞体外培养反映药物作用 | 第17-18页 |
| 1.3 体外微环境调控肝细胞聚集及其机理研究 | 第18-21页 |
| 1.3.1 体外微环境调控肝细胞聚集 | 第18-20页 |
| 1.3.2 肝细胞聚集机理研究 | 第20-21页 |
| 1.4 肝细胞生物反应器 | 第21-24页 |
| 1.4.1 生物人工肝 | 第21-23页 |
| 1.4.2 肝细胞微型反应器 | 第23-24页 |
| 1.5 本课题的主要研究思路 | 第24-25页 |
| 第2章 材料与方法 | 第25-35页 |
| 2.1 主要试剂与仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.1 试剂 | 第25页 |
| 2.1.2 仪器 | 第25-26页 |
| 2.2 肝细胞的分离与培养 | 第26-27页 |
| 2.2.1 大鼠肝细胞分离 | 第26页 |
| 2.2.2 人肝细胞分离 | 第26页 |
| 2.2.3 单层贴壁培养 | 第26页 |
| 2.2.4 三明治培养 | 第26-27页 |
| 2.3 水凝胶的制备与细胞培养 | 第27-29页 |
| 2.3.1 海藻酸钙水凝胶制备 | 第27页 |
| 2.3.2 PEG水凝胶制备 | 第27页 |
| 2.3.3 水凝胶物理性质表征 | 第27-28页 |
| 2.3.4 细胞在水凝胶上/中的培养 | 第28页 |
| 2.3.5 胶原的荧光标记 | 第28页 |
| 2.3.6 细胞的观察与统计 | 第28-29页 |
| 2.4 反应器的构建与功能表征 | 第29-31页 |
| 2.4.1 PEG接枝聚砜材料共混制备中空纤维膜 | 第29页 |
| 2.4.2 反应器的构建 | 第29页 |
| 2.4.3 细胞活率检测 | 第29页 |
| 2.4.4 尿素含量分析 | 第29页 |
| 2.4.5 白蛋白分析 | 第29-30页 |
| 2.4.6 细胞CYP 450酶活测定 | 第30页 |
| 2.4.7 线粒体膜电位检测 | 第30页 |
| 2.4.8 活性氧自由基检测 | 第30页 |
| 2.4.9 肝细胞中丙二醛含量检测 | 第30页 |
| 2.4.10 RT-PCR | 第30-31页 |
| 2.5 反应器的糖和脂肪代谢功能分析及药物作用实验 | 第31-33页 |
| 2.5.1 葡萄糖消耗量 | 第31页 |
| 2.5.2 糖原含量 | 第31页 |
| 2.5.3 糖原分解与糖质新生 | 第31页 |
| 2.5.4 磷酸烯醇式丙酮酸激酶(PEPCK)酶活 | 第31-32页 |
| 2.5.5 激素响应实验 | 第32页 |
| 2.5.6 高糖响应实验 | 第32页 |
| 2.5.7 胞内甘油三酯(TG)含量检测 | 第32页 |
| 2.5.8 尼罗红荧光检测脂肪积累 | 第32页 |
| 2.5.9 β-羟丁酸(BHB)含量测定 | 第32-33页 |
| 2.5.10 药物作用实验 | 第33页 |
| 2.6 统计学处理 | 第33-35页 |
| 第3章 肝细胞自组装调控规律及机理研究 | 第35-55页 |
| 3.1 海藻酸钙与PEG水凝胶的溶胀特性与均匀度表征 | 第35-36页 |
| 3.2 水凝胶空腔调控肝细胞自组装 | 第36-42页 |
| 3.2.1 有、无空腔时肝细胞聚集比较 | 第36-37页 |
| 3.2.2 空腔形状对肝细胞聚集的影响 | 第37-40页 |
| 3.2.3 空腔尺寸对肝细胞聚集的影响 | 第40-42页 |
| 3.3 细胞接种密度调控肝细胞自组装 | 第42-43页 |
| 3.4 生物大分子促进肝细胞自组装 | 第43-46页 |
| 3.4.1 海藻酸钙对肝细胞聚集的影响 | 第43-45页 |
| 3.4.2 胶原促进肝细胞聚集 | 第45-46页 |
| 3.5 三维微环境调控肝细胞聚集的规律 | 第46-47页 |
| 3.6 肝细胞自组装的可能机理研究 | 第47-53页 |
| 3.6.1 阐明肝细胞的动态聚集过程 | 第47-49页 |
| 3.6.2 细胞骨架在肝细胞聚集中的作用 | 第49-50页 |
| 3.6.3 肝细胞聚集体中表面粘附分子的基因表达 | 第50-51页 |
| 3.6.4 胶原-肝细胞相互作用的考察 | 第51-53页 |
| 3.7 本章小结 | 第53-55页 |
| 第4章 肝细胞组织化反应器的构建及分泌和药物代谢功能评价 | 第55-65页 |
| 4.1 中空纤维膜材质的筛选 | 第55-57页 |
| 4.2 PEG改性中空纤维膜用于肝细胞组织化反应器构建 | 第57-59页 |
| 4.2.1 中空纤维膜中聚集体的形态和功能 | 第57-58页 |
| 4.2.2 柱状聚集体的微观结构 | 第58-59页 |
| 4.3 组织化反应器的功能表征 | 第59-62页 |
| 4.3.1 细胞活率及肝特异性功能 | 第59-60页 |
| 4.3.2 Ⅰ相代谢酶活性及对应基因表达 | 第60-62页 |
| 4.4 组织化反应器用于人源肝细胞培养 | 第62-63页 |
| 4.4.1 原代人肝细胞的聚集体培养 | 第62-63页 |
| 4.4.2 肝癌细胞系HepG2的聚集体培养 | 第63页 |
| 4.5 本章小结 | 第63-65页 |
| 第5章 肝细胞组织化反应器的糖和脂肪代谢功能评价 | 第65-77页 |
| 5.1 糖代谢功能表达 | 第65-67页 |
| 5.2 脂代谢功能表达 | 第67-68页 |
| 5.3 糖和脂肪代谢关键基因表达 | 第68-72页 |
| 5.4 对激素的生理响应 | 第72-73页 |
| 5.5 对高糖的病理响应 | 第73-75页 |
| 5.6 糖和脂肪代谢功能的体内外对比 | 第75-76页 |
| 5.7 本章小结 | 第76-77页 |
| 第6章 肝细胞组织化反应器反映降糖降脂药物作用 | 第77-89页 |
| 6.1 PPARγ激动剂曲格列酮的药理研究 | 第77-81页 |
| 6.1.1 曲格列酮对肝细胞糖代谢的调节作用 | 第77-79页 |
| 6.1.2 曲格列酮对肝细胞脂代谢的调节作用 | 第79-80页 |
| 6.1.3 曲格列酮对肝细胞糖和脂肪代谢相关基因的调节作用 | 第80-81页 |
| 6.2 PPARδ激动剂GW501516的药理研究 | 第81-84页 |
| 6.2.1 GW501516对肝细胞糖代谢的调节作用 | 第81-83页 |
| 6.2.2 GW501516对肝细胞脂代谢的调节作用 | 第83页 |
| 6.2.3 GW501516对肝细胞糖和脂肪代谢相关基因的调节作用 | 第83-84页 |
| 6.3 PPAPα激动剂非诺贝特的药理研究 | 第84-86页 |
| 6.3.1 非诺贝特对肝细胞糖代谢的调节作用 | 第84-85页 |
| 6.3.2 非诺贝特对肝细胞脂代谢的调节作用 | 第85页 |
| 6.3.3 非诺贝特对肝细胞糖和脂肪代谢相关基因的调节作用 | 第85-86页 |
| 6.4 PPARs激动剂作用效果体内外结果对比 | 第86-88页 |
| 6.5 本章小结 | 第88-89页 |
| 第7章 结论与展望 | 第89-91页 |
| 7.1 总结 | 第89页 |
| 7.2 不足之处 | 第89-90页 |
| 7.3 展望 | 第90-91页 |
| 论文主要创新点 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-103页 |
| 攻读学位期间的科研成果 | 第103页 |
