| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-20页 |
| 1.1 羟脯氨酸概述 | 第11-13页 |
| 1.1.1 羟脯氨酸的简介 | 第11页 |
| 1.1.2 4-L-羟脯氨酸的应用 | 第11-12页 |
| 1.1.3 L-羟脯氨酸的生产方法及国内外生产状况 | 第12-13页 |
| 1.2 生物转化法 | 第13-18页 |
| 1.2.1 生物转化法生产顺式4L-羟脯氨酸的进展 | 第13-14页 |
| 1.2.2 外源蛋白在重组大肠杆菌中的高效表达 | 第14-15页 |
| 1.2.3 重组大肠杆菌发酵工艺的优化 | 第15页 |
| 1.2.4 重组大肠杆菌的发酵培养基 | 第15-16页 |
| 1.2.5 接种量 | 第16页 |
| 1.2.6 溶氧浓度 | 第16-17页 |
| 1.2.7 发酵温度 | 第17页 |
| 1.2.8 pH值的优化 | 第17页 |
| 1.2.9 诱导剂的选择及诱导表达方式 | 第17-18页 |
| 1.3 本课题研究意义和内容 | 第18-20页 |
| 1.3.1 生物转化法生产羟脯氨酸的技术路线 | 第19-20页 |
| 2 产顺式4L-羟脯氨酸羟化酶工程菌的构建 | 第20-34页 |
| 2.1 材料与方法 | 第20-24页 |
| 2.1.1 菌种 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂和试剂配方 | 第20-24页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 cis-P4H基因的优化与合成 | 第24-25页 |
| 2.2.2 cis-P4H基因表达载体的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.3 cis-P4H的诱导、表达及纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.4 cis-P4H的酶活力及稳定性测定 | 第27-28页 |
| 2.2.5 cis4Hyp定量检测 | 第28页 |
| 2.3 结果和分析 | 第28-32页 |
| 2.3.1 cis-P4H基因的优化结果 | 第28-29页 |
| 2.3.2 阳性克隆PCR验证 | 第29-30页 |
| 2.3.3 cis-P4H的表达及纯化 | 第30页 |
| 2.3.4 cis-P4H催化反应产物分析 | 第30-31页 |
| 2.3.5 cis-P4H稳定性 | 第31-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-34页 |
| 3 生物转化法生产顺式4L-羟脯氨酸的研究 | 第34-45页 |
| 3.1 材料 | 第34页 |
| 3.1.1 工程菌株 | 第34页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第34页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-36页 |
| 3.2.1 生物转化生产cis4Hyp方法的建立 | 第34-35页 |
| 3.2.2 cis4Hyp定量检测 | 第35页 |
| 3.2.3 诱导起始菌体的浓度优化 | 第35页 |
| 3.2.4 诱导温度的优化 | 第35页 |
| 3.2.5 诱导时间的优化 | 第35页 |
| 3.2.6 生物转化体系pH优化 | 第35-36页 |
| 3.2.7 转化温度的优化 | 第36页 |
| 3.2.8 正交实验 | 第36页 |
| 3.2.9 生物转化最适时间的确定 | 第36页 |
| 3.3 结果 | 第36-43页 |
| 3.3.1 生物转化生产cis4Hyp的检测 | 第36-37页 |
| 3.3.2 诱导起始菌体浓度优化 | 第37-38页 |
| 3.3.3 诱导温度的优化 | 第38-39页 |
| 3.3.4 诱导时间的优化 | 第39-40页 |
| 3.3.5 生物转化体系pH的优化 | 第40-41页 |
| 3.3.6 生物转化温度优化 | 第41-42页 |
| 3.3.7 正交实验对转化条件的优化 | 第42页 |
| 3.3.8 生物转化最适时间的优化 | 第42-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-45页 |
| 4 重组大肠杆菌BL21(PET-cis-P4H)产顺式4L-脯氨酸羟化酶发酵条件的优化 | 第45-58页 |
| 4.1 材料与方法 | 第45-48页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第45页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第45-48页 |
| 4.2 结果 | 第48-56页 |
| 4.2.1 种子生长曲线的绘制 | 第48-49页 |
| 4.2.2 发酵培养基的优化 | 第49-52页 |
| 4.2.3 诱导剂乳糖浓度的筛选 | 第52-53页 |
| 4.2.4 接种量的优化 | 第53-54页 |
| 4.2.5 发酵培养基初始pH的优化 | 第54-55页 |
| 4.2.6 发酵温度的优化 | 第55页 |
| 4.2.7 重组大肠杆菌 5 L发酵罐放大培养 | 第55-56页 |
| 4.3 讨论 | 第56-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 附图 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果清单 | 第69页 |
