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铜绿假单胞菌PAO1萘菲降解基因的筛选和PA0334-0335操纵子的功能研究

中文摘要第3-5页
Abstract第5-6页
中英文缩略词表第10-11页
第一章 绪论第11-24页
    1.1 多环芳烃的微生物降解第11-16页
        1.1.1 降解多环芳烃的微生物第11-13页
        1.1.2 微生物多环芳烃降解的遗传学基础第13-16页
    1.2 假单胞菌中多环芳烃降解途径第16-18页
        1.2.1 假单胞菌萘降解途径第16-17页
        1.2.2 假单胞菌菲降解途径第17-18页
    1.3 影响铜绿假单胞菌降解多环芳烃的主要因素第18-19页
        1.3.1 多环芳烃的生物可利用性第18-19页
        1.3.2 铜绿假单胞菌分泌的促降解物质第19页
        1.3.3 铜绿假单胞菌的主动外排机制第19页
        1.3.4 其他影响因素第19页
    1.4 铜绿假单胞菌的外排系统第19-21页
        1.4.1 铜绿假单胞菌的外排系统分类第20页
        1.4.2 铜绿假单胞菌的外排系统特点第20页
        1.4.3 铜绿假单胞菌的外排系统与多环芳烃降解第20-21页
    1.5 主要易化子超家族第21-22页
        1.5.1 主要易化子超家族蛋白质三维结构第21-22页
        1.5.2 主要易化子超家族蛋白质转运机制的研究第22页
        1.5.3 主要易化子超家族蛋白质研究前景展望第22页
    1.6 研究内容及意义第22-24页
第二章 实验材料和方法第24-39页
    2.1 实验材料第24-30页
        2.1.1 菌株、质粒和引物第24-26页
        2.1.2 培养基及溶液第26-27页
        2.1.3 抗生素第27-29页
        2.1.4 实验试剂第29-30页
        2.1.5 实验仪器第30页
    2.2 实验方法第30-39页
        2.2.1 质粒DNA小量提取第30页
        2.2.2 琼脂糖凝胶DNA片段纯化回收第30-31页
        2.2.3 大肠杆菌(DH10B)感受态细胞的制备第31页
        2.2.4 铜绿假单胞菌(PAO1)感受态细胞的制备第31页
        2.2.5 聚合酶链式反应第31-32页
        2.2.6 酶切及连接反应第32-33页
        2.2.7 电转化第33页
        2.2.8 高效液相法测定降解效率第33页
        2.2.9 细菌菌落计数法第33页
        2.2.10 转座突变体库筛选第33-34页
        2.2.11 随机PCR第34-35页
        2.2.12 确定转座子插入位点第35页
        2.2.13 基因互补第35页
        2.2.14 基因敲除第35-36页
        2.2.15 抗生素敏感性测定第36页
        2.2.16 最小抑制浓度测定第36页
        2.2.17 细菌运动性测定第36-37页
        2.2.18 生物被膜产量测定第37页
        2.2.19 不同碳源上生长情况测定第37页
        2.2.20 压力耐受性实验第37页
        2.2.21 外膜稳定性测定第37-39页
第三章 实验结果第39-56页
    3.1 高效液相分析铜绿假单胞菌PAO1对于菲萘的降解效率第39-40页
        3.1.1 高效液相分析铜绿假单胞菌PAO1对于萘的降解效率第39页
        3.1.2 高效液相分析铜绿假单胞菌PAO1对于菲的降解效率第39-40页
    3.2 转座突变体库的筛选第40-42页
        3.2.1 转座突变体库的筛选结果第40-41页
        3.2.2 转座突变体中转座子的插入位置的确定第41-42页
        3.2.3 转座子插入区域的基本信息第42页
    3.3 操纵子PA 0334-0335的相关研究第42-47页
        3.3.1 PA0334基因以及PA0334-0335操纵子的互补第42-44页
        3.3.2 PA0335基因过表达第44-45页
        3.3.3 PA0334-0335基因敲除第45-47页
    3.4 PA0334-0335功能研究第47-56页
        3.4.1 生物信息学分析第47-48页
        3.4.2 正常条件下的生长分析第48-49页
        3.4.3 碳源限制环境下的生长分析第49-50页
        3.4.4 抗生素的敏感性分析第50-51页
        3.4.5 外膜的完整性和稳定性分析第51-52页
        3.4.6 压力耐受性分析第52页
        3.4.7 菌落形态和细菌形态第52-53页
        3.4.8 生物被膜产量第53-54页
        3.4.9 运动性分析第54-56页
第四章 讨论与结论第56-59页
参考文献第59-67页
硕士期间科研成果第67-68页
致谢第68页

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