| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第8-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| 1 Toll样受体概述 | 第13-18页 |
| 1.1 TLR的结构及分布 | 第14页 |
| 1.2 TLR功能 | 第14-15页 |
| 1.3 TLR信号通路 | 第15-18页 |
| 1.3.1 MyD88依赖型途径 | 第16-17页 |
| 1.3.2 MyD88非依赖型途径 | 第17-18页 |
| 2 NOD概述 | 第18-20页 |
| 2.1 NOD的结构及分布 | 第18页 |
| 2.2 NOD功能 | 第18-19页 |
| 2.3 NOD的信号通路 | 第19-20页 |
| 3 成纤维细胞的免疫相关作用 | 第20-21页 |
| 4 成纤维细胞中TLR和NOD表达及功能 | 第21-23页 |
| 5 研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 奶牛乳腺成纤维细胞的分离培养 | 第24-32页 |
| 1 试验材料 | 第24-25页 |
| 1.1 试剂 | 第24页 |
| 1.2 仪器 | 第24页 |
| 1.3 材料 | 第24页 |
| 1.4 实验常用试剂配制 | 第24-25页 |
| 2 试验方法 | 第25-27页 |
| 2.1 奶牛乳腺组织采样处理 | 第25页 |
| 2.2 组织块法培养原代乳腺成纤维细胞 | 第25-26页 |
| 2.3 乳腺成纤维细胞的纯化 | 第26页 |
| 2.4 绘制奶牛乳腺成纤维细胞生长曲线图 | 第26页 |
| 2.5 奶牛乳腺成纤维细胞的冻存与复苏 | 第26-27页 |
| 2.6 奶牛乳腺成纤维细胞的形态鉴定 | 第27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-30页 |
| 3.1 奶牛乳腺成纤维细胞的原代培养 | 第27-28页 |
| 3.2 奶牛乳腺成纤维细胞生长曲线图 | 第28-29页 |
| 3.3 奶牛乳腺成纤维细胞的冻存及复苏 | 第29页 |
| 3.4 吉姆萨染色对细胞的形态鉴定 | 第29-30页 |
| 4 讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 奶牛乳腺成纤维细胞中TLR mRNA表达及半定量分析 | 第32-39页 |
| 1 试验材料 | 第32-33页 |
| 1.1 试剂 | 第32-33页 |
| 1.2 仪器 | 第33页 |
| 1.3 材料 | 第33页 |
| 2 试验方法 | 第33-35页 |
| 2.1 引物设计及合成 | 第33-34页 |
| 2.2 脾脏组织及奶牛乳腺成纤维细胞总RNA的提取 | 第34页 |
| 2.3 cDNA第1链合成 | 第34-35页 |
| 2.4 PCR反应 | 第35页 |
| 2.5 基因半定量分析 | 第35页 |
| 2.6 统计学分析 | 第35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-37页 |
| 3.1 脾脏中TLR1～TLR10基因RT-PCR | 第35-36页 |
| 3.2 TLR1～TLR10在奶牛乳腺成纤维细胞中的表达 | 第36页 |
| 3.3 奶牛乳腺成纤维细胞中TLR1-TLR10表达半定量分析 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 奶牛乳腺成纤维细胞中NOD表达及半定量分析 | 第39-45页 |
| 1 试验材料 | 第39-40页 |
| 1.1 试剂 | 第39页 |
| 1.2 仪器 | 第39-40页 |
| 1.3 材料 | 第40页 |
| 2 试验方法 | 第40-41页 |
| 2.1 引物设计及合成 | 第40页 |
| 2.2 脾脏组织及奶牛乳腺成纤维细胞总RNA的提取 | 第40-41页 |
| 2.3 cDNA第1链合成 | 第41页 |
| 2.4 PCR反应 | 第41页 |
| 2.5 基因半定量分析 | 第41页 |
| 2.6 统计学分析 | 第41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-43页 |
| 3.1 脾脏中NOD1和NOD2基因RT-PCR | 第41-42页 |
| 3.2 NOD1和NOD2在奶牛乳腺成纤维细胞中的表达 | 第42页 |
| 3.3 奶牛乳腺成纤维细胞中NOD基因表达半定量分析 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 第五章 奶牛乳腺成纤维细胞中TLR和NOD信号通路相关基因及其下游炎症因子mRNA表达检测 | 第45-51页 |
| 1 试验材料 | 第46页 |
| 1.1 试剂 | 第46页 |
| 1.2 仪器 | 第46页 |
| 2 试验方法 | 第46-48页 |
| 2.1 引物设计及合成 | 第46-47页 |
| 2.2 奶牛乳腺成纤维细胞总RNA的提取 | 第47页 |
| 2.3 cDNA第1链合成 | 第47-48页 |
| 2.4 PCR反应 | 第48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-49页 |
| 3.1 奶牛乳腺成纤维细胞中TLR和NOD信号通路相关基因的表达 | 第48-49页 |
| 3.2 奶牛乳腺成纤维细胞中炎症因子的表达 | 第49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 第六章 PAMP诱导对奶牛乳腺成纤维细胞中TLR4、NOD2、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表达影响 | 第51-59页 |
| 1 试验材料 | 第51-53页 |
| 1.1 试剂 | 第51-52页 |
| 1.2 仪器 | 第52页 |
| 1.3 实验常用试剂配制 | 第52-53页 |
| 2 试验方法 | 第53-55页 |
| 2.1 引物设计及合成 | 第53页 |
| 2.2 细胞处理 | 第53页 |
| 2.3 lipid A和MDP刺激细胞 | 第53-54页 |
| 2.4 奶牛乳腺成纤维细胞总RNA的提取 | 第54页 |
| 2.5 cDNA第1链合成 | 第54页 |
| 2.6 PCR反应 | 第54页 |
| 2.7 基因半定量分析 | 第54-55页 |
| 2.8 统计学分析 | 第55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-57页 |
| 3.1 lipid A诱导对奶牛乳腺成纤维细胞中TLR4、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表达影响 | 第55-56页 |
| 3.2 MDP诱导对奶牛乳腺成纤维细胞中NOD2、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA影响 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 结论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
