| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| ·嗜铁钩端螺旋菌简介 | 第12-13页 |
| ·镍的生理学功能与毒害 | 第13-14页 |
| ·镍的生理学功能 | 第13页 |
| ·镍对微生物的毒害 | 第13-14页 |
| ·镍离子的转运 | 第14-15页 |
| ·镍的摄取 | 第14-15页 |
| ·镍的外排 | 第15页 |
| ·镍离子转运调节及研究进展 | 第15-21页 |
| ·微生物抗镍菌株的筛选 | 第15-16页 |
| ·微生物抗镍操纵子的克隆 | 第16-17页 |
| ·微生物中抗镍操纵子表达调控的研究 | 第17-21页 |
| ·研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 镍对抗镍操纵子 ncrABCY 中基因的诱导表达分析 | 第22-31页 |
| ·实验材料 | 第22-24页 |
| ·全文所用到的菌株、质粒及引物 | 第22-24页 |
| ·实验菌株及质粒 | 第24页 |
| ·实验仪器、工具酶及试剂 | 第24页 |
| ·溶液 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-27页 |
| ·NR21 生长曲线测定 | 第24-25页 |
| ·细菌总RNA 提取 | 第25页 |
| ·cDNA 第一链的反转录合成 | 第25-26页 |
| ·RT-PCR | 第26页 |
| ·荧光定量RT-PCR | 第26-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-29页 |
| ·Ni~(2+)诱导抗镍系统的表达 | 第27页 |
| ·Ni~(2+)诱导提高抗镍基因转录水平 | 第27-28页 |
| ·荧光定量PCR 检测抗镍操纵子中ncrA 基因的表达情况 | 第28-29页 |
| ·讨论 | 第29页 |
| ·本章小结 | 第29-31页 |
| 第三章 NcrB 识别ncrA 启动子序列的鉴定 | 第31-47页 |
| ·实验材料 | 第31-33页 |
| ·实验菌株及质粒 | 第31页 |
| ·实验仪器、工具酶及试剂 | 第31页 |
| ·SDS-PAGE 电泳及Ni-NTA 层析柱纯化蛋白相所用溶液 | 第31-32页 |
| ·凝胶阻滞实验(EMSA)相关试剂 | 第32页 |
| ·S1mapping 及 Footprinting 测序胶电泳相关试剂 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-40页 |
| ·高分辨率 S1 mapping 分析确定 ncrA 转录起始位点 | 第33-35页 |
| ·电泳迁移率实验分析(EMSA) | 第35-38页 |
| ·DNaseI 足迹分析 | 第38-40页 |
| ·结果与分析 | 第40-45页 |
| ·ncrA 转录起点确定及启动子分析 | 第40-41页 |
| ·电泳迁移率实验分析(EMSA)结果 | 第41-43页 |
| ·DNaseI 足迹分析 | 第43-45页 |
| ·讨论 | 第45页 |
| ·本章小结 | 第45-47页 |
| 第四章 NcrB 蛋白阻遏ncrA 表达调控机制研究 | 第47-63页 |
| ·实验材料 | 第47-49页 |
| ·实验菌株及质粒 | 第47页 |
| ·实验仪器、工具酶及试剂 | 第47页 |
| ·细菌单杂交实验(B1H)相关试剂 | 第47-49页 |
| ·实验方法 | 第49-56页 |
| ·细菌单杂交诱饵载体的构建 | 第49-52页 |
| ·细菌单杂交报告载体的构建 | 第52-55页 |
| ·NcrB 与pncrA 的相互作用 | 第55页 |
| ·Ni~(2+)解除NcrB 与pncrA 的相互作用 | 第55页 |
| ·pncrA 上与NcrB 结合保守位点分析 | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-62页 |
| ·细菌单杂交诱饵载体的构建 | 第56-57页 |
| ·细菌单杂交报告载体的构建 | 第57页 |
| ·NcrB 与pncrA 的相互作用 | 第57-58页 |
| ·Ni~(2+)解除NcrB 与pncrA 的相互作用 | 第58-59页 |
| ·与NcrB 结合的pncrA 保守位点分析 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| ·本章小结 | 第62-63页 |
| 第五章 全文结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简历 | 第71页 |
