| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-28页 |
| 1.1 短链脱氢酶简介 | 第10-12页 |
| 1.1.1 短链脱氢酶来源 | 第10-11页 |
| 1.1.2 短链脱氢酶催化的反应类型 | 第11页 |
| 1.1.3 短链脱氢酶的结构 | 第11-12页 |
| 1.2 超嗜热菌短链脱氢酶简介 | 第12-19页 |
| 1.2.1 超嗜热菌及其耐热酶 | 第13页 |
| 1.2.2 基因来源 | 第13-15页 |
| 1.2.3 蛋白序列比较 | 第15页 |
| 1.2.4 底物特异性 | 第15-16页 |
| 1.2.5 超嗜热短链脱氢酶的稳定性 | 第16-18页 |
| 1.2.5.1 pH的作用 | 第16-17页 |
| 1.2.5.2 热稳定性 | 第17页 |
| 1.2.5.3 金属离子和金属螯合剂的影响 | 第17-18页 |
| 1.2.5.4 对有机试剂的耐性 | 第18页 |
| 1.2.6 耐热性分析 | 第18-19页 |
| 1.2.7 耐热脱氢酶在制药工业中的应用 | 第19页 |
| 1.3 手性技术的应用及研究现况 | 第19-23页 |
| 1.3.1 手性化合物与手性药物 | 第19-20页 |
| 1.3.2 手性醇 | 第20-21页 |
| 1.3.3 手性化合物的制备方法 | 第21-23页 |
| 1.3.3.1 手性源合成法 | 第22页 |
| 1.3.3.2 外消旋体拆分法 | 第22-23页 |
| 1.3.3.3 不对称合成法 | 第23页 |
| 1.4 生物法催化不对称还原合成手性醇 | 第23-26页 |
| 1.4.1 全细胞催化与纯酶催化的比较 | 第23-24页 |
| 1.4.2 酶法辅酶再生循环系统构建 | 第24-25页 |
| 1.4.2.1 底物耦联法 | 第24-25页 |
| 1.4.2.2 酶耦联法 | 第25页 |
| 1.4.3 基因工程技术的运用 | 第25-26页 |
| 1.5 本文的立题依据和研究内容 | 第26-28页 |
| 1.5.1 立题依据 | 第26页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第26-28页 |
| 第二章 耐热短链脱氢酶基因的重组表达及优化 | 第28-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 菌株和载体 | 第28页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第28页 |
| 2.1.3 培养基与溶液 | 第28-30页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-35页 |
| 2.2.1 基因编码序列的分析 | 第30-31页 |
| 2.2.2 重组表达质粒和表达菌株的构建 | 第31-33页 |
| 2.2.3 重组蛋白的诱导表达 | 第33-34页 |
| 2.2.4 表达产物SDS-PAGE电泳分析 | 第34页 |
| 2.2.5 重组表达优化 | 第34-35页 |
| 2.2.5.1 不同IPTG浓度的诱导表达 | 第34页 |
| 2.2.5.2 不同温度的诱导表达 | 第34-35页 |
| 2.2.5.3 不同时间的诱导表达 | 第35页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第35-40页 |
| 2.3.1 序列分析结果 | 第35页 |
| 2.3.2 重组表达质粒和表达菌株的构建 | 第35-37页 |
| 2.3.3 重组菌表达及产物检测 | 第37-38页 |
| 2.3.4 重组表达优化 | 第38-40页 |
| 2.4 本章主要结论和成果 | 第40-41页 |
| 第三章 重组耐热短链脱氢酶SDR3的分离纯化及酶学性质研究 | 第41-56页 |
| 3.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 实验菌株 | 第41页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第41-42页 |
| 3.1.3 主要溶液与缓冲液 | 第42页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-47页 |
| 3.2.1 酶的热处理 | 第42-43页 |
| 3.2.2 重组蛋白纯化 | 第43-45页 |
| 3.2.2.1 纯化原理 | 第43页 |
| 3.2.2.2 纯化步骤 | 第43-45页 |
| 3.2.3 醇脱氢酶活力测定 | 第45-46页 |
| 3.2.3.1 酶活测定原理 | 第45页 |
| 3.2.3.2 酶活力测定体系 | 第45页 |
| 3.2.3.3 酶活测定过程 | 第45-46页 |
| 3.2.4 短链脱氢酶SDR3酶学性质研究 | 第46-47页 |
| 3.2.4.1 底物特异性 | 第46页 |
| 3.2.4.2 温度对酶活力的影响及热稳定性 | 第46-47页 |
| 3.2.4.3 pH对酶活力的影响 | 第47页 |
| 3.2.4.4 金属离子等对酶活影响 | 第47页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第47-54页 |
| 3.3.1 酶的热处理 | 第47-48页 |
| 3.3.2 重组蛋白的分离纯化 | 第48-49页 |
| 3.3.3 短链脱氢酶SDR3酶学性质研究 | 第49-54页 |
| 3.3.3.1 底物特异性 | 第49-51页 |
| 3.3.3.2 最适酶反应温度和酶热稳定性 | 第51-53页 |
| 3.3.3.3 最适酶反应pH | 第53-54页 |
| 3.3.3.4 金属离子等对酶活影响 | 第54页 |
| 3.4 本章主要结论和成果 | 第54-56页 |
| 第四章 重组耐热短链脱氢酶SDR3不对称转化苯甲酰甲酸乙酯的研究 | 第56-72页 |
| 4.1 实验材料 | 第56-57页 |
| 4.1.1 实验菌种 | 第56页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第56-57页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第57页 |
| 4.2 实验方法 | 第57-62页 |
| 4.2.1 液相分析方法建立 | 第57-58页 |
| 4.2.2 不对称转化方法建立 | 第58-59页 |
| 4.2.3 辅酶NADH循环系统构建 | 第59-60页 |
| 4.2.4 反应体系优化 | 第60-61页 |
| 4.2.4.1 反应温度影响 | 第60-61页 |
| 4.2.4.2 反应时间影响 | 第61页 |
| 4.2.4.3 SDR3浓度影响 | 第61页 |
| 4.2.4.4 GDH浓度影响 | 第61页 |
| 4.2.4.5 初始NADH浓度影响 | 第61页 |
| 4.2.4.6 GDH含量再次优化 | 第61页 |
| 4.2.5 参量的计算 | 第61-62页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第62-70页 |
| 4.3.1 液相分析方法建立 | 第62-64页 |
| 4.3.2 不对称反应及辅酶循环系统结果 | 第64-65页 |
| 4.3.3 反应体系优化 | 第65-70页 |
| 4.3.3.1 反应温度和反应时间 | 第66-67页 |
| 4.3.3.2 SDR3浓度优化 | 第67页 |
| 4.3.3.3 GDH浓度优化 | 第67-69页 |
| 4.3.3.4 初始NADH浓度优化 | 第69-70页 |
| 4.3.3.5 GDH浓度再次优化 | 第70页 |
| 4.4 本章主要结论和成果 | 第70-72页 |
| 第五章 结论与展望 | 第72-74页 |
| 5.1 结论 | 第72页 |
| 5.2 展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第81页 |