| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略词 | 第7-10页 |
| 1 前言 | 第10-17页 |
| 1.1 非淀粉多糖酶研究进展 | 第10-13页 |
| 1.1.1 非淀粉多糖简介 | 第10-11页 |
| 1.1.2 非淀粉多糖的抗营养作用 | 第11-12页 |
| 1.1.3 非淀粉多糖酶种类及作用机理 | 第12-13页 |
| 1.2 非淀粉多糖酶制剂在畜禽饲料中的应用及存在的问题 | 第13-14页 |
| 1.3 通过转基因技术在动物消化道表达非淀粉多糖酶研究进展 | 第14-15页 |
| 1.4 多顺反子构建技术研究进展 | 第15-16页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-34页 |
| 2.1 试验材料 | 第17-22页 |
| 2.1.1 试验材料和主要试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.2 主要溶液的配制 | 第18-21页 |
| 2.1.3 主要试验仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-34页 |
| 2.2.1 技术路线 | 第22-23页 |
| 2.2.2 候选基因密码子优化及其真核表达载体构建 | 第23页 |
| 2.2.3 PK15细胞表达的纤维素酶酶学性质测定 | 第23-25页 |
| 2.2.4 PK15细胞表达的木聚糖酶酶学性质测定 | 第25页 |
| 2.2.5 木聚糖酶基因在PK15细胞中的表达检测 | 第25-27页 |
| 2.2.6 PK15细胞表达的果胶酶酶学性质测定 | 第27-29页 |
| 2.2.7 木聚糖酶asp-xyn和纤维素酶egII共表达方案比较和筛选 | 第29-30页 |
| 2.2.8 pCD-EsAPPA-T2A和pCD-TeEGI-T2A表达验证 | 第30-32页 |
| 2.2.9 多顺反子pCD-PXAT构建、表达及酶活检测 | 第32-33页 |
| 2.2.10 pPB-mPSP-PXAT-neoGFP载体构建方法 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-58页 |
| 3.1 纤维素酶基因筛选及酶学性质测定 | 第34-43页 |
| 3.1.1 来源于里氏木霉、丝状真菌、天牛的三种纤维素酶基因在PK15细胞中表达的酶活比较 | 第35-36页 |
| 3.1.2 来源于梭状芽孢杆菌、天牛、蟋蟀的三种纤维素酶基因在PK15细胞中表达的纤维素酶活性对比 | 第36-38页 |
| 3.1.3 在PK15细胞中表达的纤维素酶egII的酶学性质分析 | 第38-40页 |
| 3.1.4 在PK15细胞中表达的纤维素酶TeEGI的酶学性质分析 | 第40-43页 |
| 3.2 果胶酶基因筛选及酶学性质测定 | 第43-47页 |
| 3.2.1 来源于沙栖梭孢壳菌、毛壳菌、黑曲霉的三种果胶酶基因在PK15细胞中表达的果胶酶活性对比 | 第43-44页 |
| 3.2.2 在PK15细胞中表达的果胶酶PG7fn的酶学性质分析 | 第44-46页 |
| 3.2.3 在PK15细胞中表达的果胶酶PG的酶学性质分析 | 第46-47页 |
| 3.3 在PK15细胞中表达的木聚糖酶asp-xyn、xynlII、penxyl的酶学性质分析 | 第47-49页 |
| 3.4 木聚糖酶基因在PK15细胞中的表达检测 | 第49-50页 |
| 3.5 果胶酶基因在PK15细胞的表达检测 | 第50-51页 |
| 3.6 木聚糖酶基因asp-xyn和纤维素酶基因egII共表达方案比较和筛选 | 第51-54页 |
| 3.7 植酸酶基因EsAPPA和纤维素酶基因TeEGI表达验证 | 第54-55页 |
| 3.8 多顺反子pCD-PXAT构建、表达及酶活检测 | 第55-58页 |
| 3.9 pPB-mPSP-PXAT-neoGFP载体构建 | 第58页 |
| 4 讨论 | 第58-62页 |
| 4.1 纤维素酶基因在猪细胞中的表达 | 第58-59页 |
| 4.2 果胶酶基因在猪细胞中的表达 | 第59-60页 |
| 4.3 木聚糖酶基因在猪细胞中的表达 | 第60-61页 |
| 4.4 影响外源基因在猪细胞中表达的因素 | 第61-62页 |
| 4.5 体外多基因共表达产生的酶活与单基因表达产生的酶活差异 | 第62页 |
| 5 结论 | 第62-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
