| 致谢 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-12页 |
| 1.1 小麦冻害的研究 | 第8-9页 |
| 1.2 抗冻蛋白研究进展 | 第9页 |
| 1.3 启动子研究进展 | 第9-10页 |
| 1.4 基因编辑研究进展 | 第10-12页 |
| 2 引言 | 第12-13页 |
| 3 材料与方法 | 第13-32页 |
| 3.1 实验材料 | 第13-16页 |
| 3.1.1 植物材料与处理 | 第13页 |
| 3.1.2 菌株及载体材料 | 第13-14页 |
| 3.1.3 实验所用试剂及耗材 | 第14页 |
| 3.1.4 实验器材 | 第14页 |
| 3.1.5 实验所用引物序列 | 第14-15页 |
| 3.1.6 实验用培养基及试剂配方 | 第15-16页 |
| 3.2 实验方法 | 第16-18页 |
| 3.2.1 DNA的提取 | 第16-17页 |
| 3.2.2 RNA的提取 | 第17页 |
| 3.2.3 cDNA第一条链的合成 | 第17-18页 |
| 3.3 基因克隆及序列分析 | 第18-21页 |
| 3.3.1 目的基因的克隆 | 第18页 |
| 3.3.2 琼脂糖胶回收 | 第18-19页 |
| 3.3.3 pMD19-T载体连接 | 第19页 |
| 3.3.4 重组载体的转化 | 第19-20页 |
| 3.3.5 重组载体的质粒提取 | 第20页 |
| 3.3.6 TaIRI5基因序列分析 | 第20-21页 |
| 3.4 TaIRI5基因的表达分析 | 第21-22页 |
| 3.4.1 候选基因半定量检测 | 第21页 |
| 3.4.2 TaIRI5基因的组织特异性表达分析 | 第21-22页 |
| 3.4.3 TaIRI5基因的胁迫表达分析 | 第22页 |
| 3.5 TaIRI5基因亚细胞定位研究 | 第22-24页 |
| 3.5.1 引物设计 | 第22页 |
| 3.5.2 目的基因的制备与载体线性化 | 第22-23页 |
| 3.5.3 重组载体的构建 | 第23-24页 |
| 3.5.4 根癌农杆菌转化 | 第24页 |
| 3.5.5 农杆菌介导的烟草转化实验 | 第24页 |
| 3.6 TaIRI5基因启动子功能研究 | 第24-27页 |
| 3.6.1 启动子序列分析 | 第24-25页 |
| 3.6.2 引物设计 | 第25页 |
| 3.6.3 启动子重组载体的构建 | 第25-26页 |
| 3.6.4 启动子重组载体农杆菌转化 | 第26页 |
| 3.6.5 农杆菌介导的启动子功能研究 | 第26-27页 |
| 3.7 TaIRI5基因过表达载体的构建及遗传转化 | 第27-29页 |
| 3.7.1 引物设计 | 第27页 |
| 3.7.2 目的基因的制备与载体线性化 | 第27-28页 |
| 3.7.3 TaIRI5过表达重组载体的构建 | 第28页 |
| 3.7.4 根癌农杆菌转化 | 第28页 |
| 3.7.5 农杆菌介导的小麦茎尖转化实验 | 第28-29页 |
| 3.8 TaIRI5基因基因编辑敲除载体的构建及遗传转化 | 第29-32页 |
| 3.8.1 基因编辑引物设计 | 第29页 |
| 3.8.2 gRNA表达盒的连接 | 第29页 |
| 3.8.3 gRNA表达盒扩增引物 | 第29-30页 |
| 3.8.4 pYLCRISPR/Cas9-TaIRI5重组载体的构建 | 第30-31页 |
| 3.8.5 pYLCRISPR/Cas9-TaIRI5重组载体的验证 | 第31-32页 |
| 3.8.6 pYLCRISPR/Cas9-TaIRI5重组载体的农杆菌转化与小麦茎尖侵染 | 第32页 |
| 4 结果与分析 | 第32-45页 |
| 4.1 TaIRI5基因的克隆及生物信息学分析 | 第32-35页 |
| 4.1.1 TaIRI5基因的克隆 | 第32页 |
| 4.1.2 TaIRI5基因序列分析 | 第32-34页 |
| 4.1.3 TaIRI5基因同源比对与系统进化树分析 | 第34-35页 |
| 4.2 TaIRI5基因的表达分析 | 第35-38页 |
| 4.2.1 TaIRI5基因的半定量分析 | 第35-36页 |
| 4.2.2 TaIRI5基因的组织特异性表达分析 | 第36-37页 |
| 4.2.3 TaIRI5基因不同胁迫处理下的表达分析 | 第37-38页 |
| 4.3 TaIRI5基因的亚细胞定位分析 | 第38-41页 |
| 4.4 TaIRI5基因的启动子功能分析 | 第41-43页 |
| 4.5 TaIRI5基因过表达分析 | 第43-44页 |
| 4.6 TaIRI5基因基因编辑分析 | 第44-45页 |
| 5 讨论 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 英文摘要 | 第53-54页 |
