| 本论文研究的创新性 | 第12-13页 |
| 摘要(中文) | 第13-15页 |
| 摘要(英文) | 第15页 |
| 主要缩略语 | 第17-18页 |
| 表格一览表 | 第18-20页 |
| 图一览表 | 第20-21页 |
| 第一章 文献综述 | 第21-60页 |
| 1.1 农杆菌介导单子叶植物遗传转化研究进展 | 第21-33页 |
| 1.1.1 根癌农杆菌介导的遗传转化机理 | 第21-24页 |
| 1.1.2 农杆菌介导的遗传转化特点 | 第24-25页 |
| 1.1.3 农杆菌介导单子叶植物遗传转化进展 | 第25-27页 |
| 1.1.4 农杆菌介导单子叶植物遗传转化的影响因素 | 第27-31页 |
| 1.1.4.1 植物基因型 | 第27-28页 |
| 1.1.4.2 外植体 | 第28页 |
| 1.1.4.3 农杆菌菌株的选择与质粒的构建 | 第28-29页 |
| 1.1.4.4 启动子的优化 | 第29页 |
| 1.1.4.5 vir基因的活化 | 第29-30页 |
| 1.1.4.6 农杆菌菌液浓度和共培养技术条件 | 第30-31页 |
| 1.1.5 农杆菌介导单子叶植物遗传转化的发展策略 | 第31-33页 |
| 1.1.5.1 农杆菌介导法与基因枪法相结合 | 第31页 |
| 1.1.5.2 构建超毒质粒载体和农感染型质粒 | 第31页 |
| 1.1.5.3 不依赖于诱导物的vir基因高效活化 | 第31-32页 |
| 1.1.5.4 受体材料预创伤处理 | 第32页 |
| 1.1.5.5 介导转移大片段DNA | 第32-33页 |
| 1.2 高羊茅和其它羊茅植株再生与遗传转化研究进展 | 第33-44页 |
| 1.2.1 植株再生体系的建立 | 第34-37页 |
| 1.2.1.1 由胚性愈伤组织再生植株 | 第34-35页 |
| 1.2.1.2 由胚性悬浮培养物再生植株 | 第35页 |
| 1.2.1.3 由原生质体再生植株 | 第35-36页 |
| 1.2.1.4 由高频再生组织再生植株 | 第36-37页 |
| 1.2.1.5 由花药-幼穗培养再生单倍体植株 | 第37页 |
| 1.2.2 胚性培养物的长期保存 | 第37-39页 |
| 1.2.2.1 继代保存 | 第37-38页 |
| 1.2.2.2 低温保存 | 第38-39页 |
| 1.2.3 外源基因的遗传转化 | 第39-42页 |
| 1.2.3.1 遗传转化概况 | 第39-41页 |
| 1.2.3.2 遗传转化影响因素 | 第41-42页 |
| 1.2.4 植株再生与遗传转化中存在的主要问题 | 第42-44页 |
| 1.2.4.1 胚性愈伤组织诱导频率低 | 第42-43页 |
| 1.2.4.2 再生植株白化现象比较严重 | 第43页 |
| 1.2.4.3 转基因后代的获得相对比较困难 | 第43-44页 |
| 1.3 CBF转录激活因子及其在提高植物耐逆性中的作用 | 第44-57页 |
| 1.3.1 CBF基因的分离与鉴定 | 第45-47页 |
| 1.3.2 CBF转录激活因子的表达 | 第47-51页 |
| 1.3.3 CBF转录激活因子的结构特点与特性 | 第51-52页 |
| 1.3.4 CBF转录激活因子的生理生化功能 | 第52-54页 |
| 1.3.5 CBF转录激活因子在提高植物耐逆性中的作用 | 第54-56页 |
| 1.3.6 CBF转录激活因子的应用展望 | 第56-57页 |
| 1.4 本论文研究的目的意义和主要内容 | 第57-60页 |
| 1.4.1 目的意义 | 第57-59页 |
| 1.4.2 主要内容 | 第59-60页 |
| 第二章 高羊茅胚性愈伤组织植株再生体系的建立 | 第60-86页 |
| 2.1 材料和方法 | 第61-64页 |
| 2.1.1 材料 | 第61页 |
| 2.1.2 方法 | 第61-64页 |
| 2.1.2.1 愈伤组织诱导及其影响因素 | 第61-62页 |
| 2.1.2.2 愈伤组织继代改造及其影响因素 | 第62-63页 |
| 2.1.2.3 胚性愈伤组织分化及其影响因素 | 第63-64页 |
| 2.2 结果与分析 | 第64-81页 |
| 2.2.1 不同因素对成熟种子愈伤组织诱导的影响 | 第64-71页 |
| 2.2.1.1 2,4-D与ABA配合 | 第64页 |
| 2.2.1.2 BAP添加 | 第64-66页 |
| 2.2.1.3 有机物添加 | 第66-67页 |
| 2.2.1.4 基本培养基类型 | 第67页 |
| 2.2.1.5 种子切割方式 | 第67-68页 |
| 2.2.1.6 辐照处理 | 第68-71页 |
| 2.2.2 不同因素对愈伤组织继代改造的影响 | 第71-76页 |
| 2.2.2.1 BAP添加 | 第71-73页 |
| 2.2.2.2 硫酸铜添加 | 第73页 |
| 2.2.2.3 提高蔗糖浓度 | 第73-76页 |
| 2.2.3 不同因素对胚性愈伤组织分化的影响 | 第76-81页 |
| 2.2.3.1 BAP与KT配比 | 第76页 |
| 2.2.3.2 NAA浓度 | 第76-78页 |
| 2.2.3.3 脯氨酸添加 | 第78-79页 |
| 2.2.3.4 高渗预分化 | 第79-81页 |
| 2.2.3.5 琼脂浓度 | 第81页 |
| 2.3 讨论 | 第81-86页 |
| 2.3.1 高羊茅胚性愈伤组织植株再生的影响因素 | 第81-84页 |
| 2.3.2 高羊茅成熟种子组织培养的品种间差异 | 第84页 |
| 2.3.3 减轻高羊茅再生植株白化现象的关键环节 | 第84-86页 |
| 第三章 农杆菌介导高羊茅遗传转化体系的建立 | 第86-108页 |
| 3.1 材料和方法 | 第87-91页 |
| 3.1.1 材料 | 第87页 |
| 3.1.1.1 植物材料 | 第87页 |
| 3.1.1.2 农杆菌菌株与质粒 | 第87页 |
| 3.1.1.3 抗生素、筛选剂和其它重要试剂 | 第87页 |
| 3.1.2 方法 | 第87-91页 |
| 3.1.2.1 确定适宜抗生素种类及其浓度试验 | 第87-88页 |
| 3.1.2.2 农杆菌介导转化影响因素试验 | 第88-89页 |
| 3.1.2.3 高羊茅对潮霉素的内源抗性试验 | 第89-90页 |
| 3.1.2.4 不同浓度潮霉素筛选效果试验 | 第90-91页 |
| 3.2 结果与分析 | 第91-105页 |
| 3.2.1 抗生素对高羊茅胚性愈伤组织生长和分化的影响 | 第91-95页 |
| 3.2.2 多种因素对农杆菌介导高羊茅愈伤组织转化效率的影响 | 第95-101页 |
| 3.2.2.1 预培养培养基 | 第95-96页 |
| 3.2.2.2 预培养时间 | 第96-97页 |
| 3.2.2.3 菌液浓度 | 第97-98页 |
| 3.2.2.4 感染时间 | 第98页 |
| 3.2.2.5 乙酰丁香酮浓度 | 第98-99页 |
| 3.2.2.6 乙酰丁香酮添加方式 | 第99-100页 |
| 3.2.2.7 共培养基pH值 | 第100-101页 |
| 3.2.2.8 共培养温度 | 第101页 |
| 3.2.2.9 共培养时间 | 第101页 |
| 3.2.3 不同浓度潮霉素的筛选效果 | 第101-105页 |
| 3.2.3.1 高羊茅胚性愈伤组织对潮霉素的内源抗性 | 第101-103页 |
| 3.2.3.2 不同浓度潮霉素筛选对高羊茅转化效率的影响 | 第103-105页 |
| 3.3 讨论 | 第105-108页 |
| 3.3.1 适用于农杆菌介导高羊茅遗传转化的抑菌抗生素 | 第105页 |
| 3.3.2 影响农杆菌介导高羊茅胚性愈伤组织转化的主要因素 | 第105-107页 |
| 3.3.3 农杆菌介导高羊茅遗传转化中合适的潮霉素筛选方式 | 第107页 |
| 3.3.4 农杆菌介导高羊茅胚性愈伤组织转化的品种间差异 | 第107-108页 |
| 第四章 转基因植株的获得与分子鉴定 | 第108-122页 |
| 4.1 材料和方法 | 第108-114页 |
| 4.1.1 材料 | 第108页 |
| 4.1.1.1 植物材料 | 第108页 |
| 4.1.1.2 菌株与质粒 | 第108页 |
| 4.1.1.3 重要试剂 | 第108页 |
| 4.1.2 方法 | 第108-114页 |
| 4.1.2.1 农杆菌介导转化及抗性愈伤组织的筛选与再生 | 第108-109页 |
| 4.1.2.2 高羊茅基因组DNA提取 | 第109-110页 |
| 4.1.2.3 hpt基因和gus基因的PCR检测 | 第110-111页 |
| 4.1.2.4 GUS组织化学染色 | 第111页 |
| 4.1.2.5 离体叶片潮霉素抗性鉴定 | 第111-112页 |
| 4.1.2.6 Southern杂交 | 第112-114页 |
| 4.2 结果与分析 | 第114-120页 |
| 4.2.1 高羊茅转基因植株的获得 | 第114-116页 |
| 4.2.2 转基因植株的PCR检测 | 第116页 |
| 4.2.3 转基因植株的GUS活性分析 | 第116-118页 |
| 4.2.4 转基因植株的离体叶片潮霉素抗性鉴定 | 第118-119页 |
| 4.2.5 转基因植株的Southern杂交分析 | 第119-120页 |
| 4.3 讨论 | 第120-122页 |
| 第五章 转基因植株的表型鉴定及遗传分析 | 第122-130页 |
| 5.1 材料和方法 | 第123-125页 |
| 5.1.1 材料 | 第123页 |
| 5.1.1.1 植物材料 | 第123页 |
| 5.1.1.2 主要试剂 | 第123页 |
| 5.1.2 方法 | 第123-125页 |
| 5.1.2.1 高盐与高渗胁迫下整株存活试验 | 第123页 |
| 5.1.2.2 不同逆境胁迫处理后叶片相对电导率测定 | 第123-124页 |
| 5.1.2.3 转基因植株形态与生长特征考察 | 第124页 |
| 5.1.2.4 T_1代转基因PCR检测 | 第124-125页 |
| 5.2 结果与分析 | 第125-128页 |
| 5.2.1 转基因植株的耐逆性表现 | 第125-128页 |
| 5.2.1.1 高盐胁迫对转基因植株存活与生长的影响 | 第125-126页 |
| 5.2.1.2 高渗胁迫对转基因植株存活与生长的影响 | 第126-127页 |
| 5.2.1.3 不同逆境胁迫处理后叶片相对电导率变化 | 第127-128页 |
| 5.2.2 转基因植株的形态与生长特征 | 第128页 |
| 5.2.3 T_1代中转基因的分离 | 第128页 |
| 5.3 讨论 | 第128-130页 |
| 第六章 高羊茅CBF转录激活因子基因片段的克隆 | 第130-135页 |
| 6.1 材料和方法 | 第131-132页 |
| 6.1.1 材料 | 第131页 |
| 6.1.1.1 植物材料 | 第131页 |
| 6.1.1.2 质粒和菌株 | 第131页 |
| 6.1.1.3 引物和试剂 | 第131页 |
| 6.1.2 方法 | 第131-132页 |
| 6.1.2.1 基因组DNA提取 | 第131页 |
| 6.1.2.2 PCR扩增 | 第131页 |
| 6.1.2.3 DNA片段重组入质粒载体 | 第131-132页 |
| 6.1.2.4 DNA序列测定及分析 | 第132页 |
| 6.2 结果与分析 | 第132-134页 |
| 6.2.1 PCR产物的扩增和克隆 | 第132-133页 |
| 6.2.2 基因序列与同源性分析 | 第133-134页 |
| 6.3 讨论 | 第134-135页 |
| 参考文献 | 第135-153页 |
| 附录 攻读博士学位期间从事科研工作情况及取得的主要业绩 | 第153-154页 |
