| 致谢 | 第4-5页 |
| 中文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 引言 | 第11-16页 |
| 1 关于hASC成脂分化调控因子的数据挖掘工作 | 第16-20页 |
| 1.1 针对多时间点多类型ChIP-Seq数据分析的CLUES+算法的建立 | 第16-18页 |
| 1.1.1 发展通用的CLUES+模型 | 第16-18页 |
| 1.1.2 建立CLUES+参数优化方法 | 第18页 |
| 1.2 运用CLUES+挖掘hASC成脂分化调控因子 | 第18-19页 |
| 1.3 数据挖掘结果分析 | 第19-20页 |
| 2 实验室hASC培养体系的建立 | 第20-27页 |
| 2.1 hASC分离优化 | 第20-23页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第20页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第20-22页 |
| 2.1.3 实验结果 | 第22-23页 |
| 2.2 hASC培养优化 | 第23-25页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.2.2 实验步骤 | 第24-25页 |
| 2.2.3 实验结果 | 第25页 |
| 2.3 小结 | 第25-27页 |
| 3 hASC的初步鉴定 | 第27-34页 |
| 3.1 扩增能力鉴定 | 第27-30页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第27页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第27-28页 |
| 3.1.3 实验结果 | 第28-30页 |
| 3.2 表面CD(cluster of differentiation)标记鉴定 | 第30-32页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第30页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第30-31页 |
| 3.2.3 实验结果 | 第31-32页 |
| 3.3 成脂分化能力鉴定 | 第32-33页 |
| 3.3.1 实验材料 | 第32页 |
| 3.3.2 实验方法 | 第32页 |
| 3.3.3 实验结果 | 第32-33页 |
| 3.4 小结 | 第33-34页 |
| 4 hASC分化完成时间点确定 | 第34-40页 |
| 4.1 实验材料 | 第34页 |
| 4.2 实验方法 | 第34-37页 |
| 4.3 实验结果 | 第37-39页 |
| 4.3.1 成脂分化过程中分化细胞比例变化情况分析 | 第37页 |
| 4.3.2 成脂分化过程中脂质积累变化情况分析 | 第37-38页 |
| 4.3.3 成脂分化过程中相关转录因子和细胞特异性蛋白表达情况分析 | 第38-39页 |
| 4.4 小结 | 第39-40页 |
| 5 针对候选的调控因子COMP基因的CRISPR-Cas9敲除实验 | 第40-46页 |
| 5.1 sgRNA设计 | 第40-41页 |
| 5.2 实验材料 | 第41-42页 |
| 5.3 实验方法 | 第42-44页 |
| 5.3.1 构建含有COMP sgRNA的lentiCRISPRv2质粒 | 第42-43页 |
| 5.3.2 利用lipofectamine3000的试剂转染293T | 第43页 |
| 5.3.3 293T包病毒过滤收集和hASC的感染实验 | 第43页 |
| 5.3.4 感染后的hASC基因组DNA收集检测基因突变情况 | 第43-44页 |
| 5.4 实验结果与小结 | 第44-46页 |
| 6 研究COMP基因敲除对hASC成脂分化影响 | 第46-50页 |
| 6.1 实验材料 | 第46页 |
| 6.2 实验方法 | 第46-47页 |
| 6.2.1 含有sgRNA1的LentiCRISPRv2质粒的病毒制备 | 第46-47页 |
| 6.2.2 病毒感染hASC | 第47页 |
| 6.2.3 hASC突变验证 | 第47页 |
| 6.2.4 突变的hASC成脂分化过程的观察 | 第47页 |
| 6.3 实验结果 | 第47-50页 |
| 7 关于COMP蛋白在hASC成脂分化过程中作用机制的猜测 | 第50-53页 |
| 总结 | 第53-54页 |
| 讨论与展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 文献综述 | 第61-77页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 作者简历 | 第77页 |
