| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 英文缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 酸性环境与细胞应答(文献综述) | 第11-15页 |
| 1.1 酸性环境对细胞的影响 | 第11-12页 |
| 1.2 瓦伯格效应与肿瘤酸性微环境 | 第12-14页 |
| 1.2.1 瓦伯格效应 | 第12-13页 |
| 1.2.2 酸性条件下的肿瘤生存 | 第13-14页 |
| 1.3 展望 | 第14-15页 |
| 引言 | 第15-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-35页 |
| 2.1 人胃癌细胞SGC7901的培养 | 第17-21页 |
| 2.1.1 试剂与仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.1.1 实验仪器 | 第17页 |
| 2.1.1.2 实验材料 | 第17页 |
| 2.1.1.3 实验试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.2 常用试剂的配置 | 第18-19页 |
| 2.1.3 实验过程及步骤 | 第19-21页 |
| 2.1.3.1 SGC7901细胞复苏 | 第19页 |
| 2.1.3.2 SGC7901细胞传代 | 第19-20页 |
| 2.1.3.3 SGC7901细胞冻存 | 第20-21页 |
| 2.2 脂质体转染 | 第21-23页 |
| 2.2.1 实验试剂和仪器 | 第21页 |
| 2.2.1.1 实验仪器 | 第21页 |
| 2.2.1.2 实验试剂 | 第21页 |
| 2.2.1.3 siRNA、菌种和质粒 | 第21页 |
| 2.2.2 常用溶剂的配置 | 第21-22页 |
| 2.2.3 实验过程及步骤 | 第22-23页 |
| 2.2.3.1 细菌培养 | 第22页 |
| 2.2.3.2 质粒提取与纯化 | 第22页 |
| 2.2.3.3 脂质体转染实验 | 第22-23页 |
| 2.3 Real Time PCR检测mRNA表达量 | 第23-27页 |
| 2.3.1 试剂和仪器 | 第23页 |
| 2.3.2 相关溶液的配置 | 第23页 |
| 2.3.3 实验过程及步骤 | 第23-27页 |
| 2.3.3.1 细胞RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.3.3.2 反转录获取cDNA | 第24-25页 |
| 2.3.3.3 Real Time PCR检测mRNA的表达量 | 第25-27页 |
| 2.4 Caspase3/7检测细胞凋亡 | 第27-28页 |
| 2.4.1 试剂和仪器 | 第27页 |
| 2.4.2 测定原理 | 第27页 |
| 2.4.3 实验过程及步骤 | 第27-28页 |
| 2.5 胞内乳酸测定 | 第28-30页 |
| 2.5.1 试剂和仪器 | 第28页 |
| 2.5.2 测定原理 | 第28页 |
| 2.5.3 相关溶液的配置 | 第28页 |
| 2.5.4 实验过程及步骤 | 第28-30页 |
| 2.5.4.1 细胞处理 | 第28页 |
| 2.5.4.2 BCA蛋白测定法标准曲线的绘制 | 第28-29页 |
| 2.5.4.3 蛋白浓度测定 | 第29页 |
| 2.5.4.5 胞内乳酸测定 | 第29-30页 |
| 2.6 Western Blot检测 | 第30-34页 |
| 2.6.1 试剂和仪器 | 第30-31页 |
| 2.6.1.1 实验仪器 | 第30页 |
| 2.6.1.2 实验药品 | 第30页 |
| 2.6.1.3 实验试剂 | 第30-31页 |
| 2.6.3 相关溶液的配置 | 第31-32页 |
| 2.6.4 实验过程及步骤 | 第32-34页 |
| 2.6.4.1 Western Blot实验方法-细胞总蛋白的提取 | 第32页 |
| 2.6.4.2 Western Blot实验 | 第32-34页 |
| 2.7 统计学处理 | 第34-35页 |
| 第三章 结果与分析 | 第35-51页 |
| 3.1 LPA通过LPAR2抵抗酸性引起的细胞凋亡 | 第35-40页 |
| 3.1.1 胞外酸性环境会导致细胞凋亡 | 第35-36页 |
| 3.1.2 LPA可以抑制酸性胁迫下人胃癌细胞SGC7901凋亡 | 第36-37页 |
| 3.1.3 人胃癌细胞SGC7901中LPA的6个受体的mRNA表达谱 | 第37页 |
| 3.1.4 干扰LPAR2细胞模型的建立与鉴定 | 第37-39页 |
| 3.1.5 LPAR2参与酸性条件下LPA的抗凋亡过程 | 第39页 |
| 3.1.6 ki16425不能抑制LPA的抗凋亡作用 | 第39-40页 |
| 3.1.7 小结 | 第40页 |
| 3.2 MCT1/4在细胞抗凋亡过程中的作用 | 第40-44页 |
| 3.2.1 干扰shMCT4细胞模型的建立与鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2.2 干扰MCT4后会促进酸性胁迫下细胞的凋亡 | 第42-43页 |
| 3.2.3 干扰LPAR2会抑制细胞中MCT1/4的mRNA表达量 | 第43页 |
| 3.2.4 干扰MCT4抑制细胞中CD147的mRNA表达量 | 第43-44页 |
| 3.2.5 小结 | 第44页 |
| 3.3 LPA/LPAR2提高细胞的排酸能力 | 第44-47页 |
| 3.3.1 酸性条件下细胞排酸能力增强 | 第45页 |
| 3.3.2 酸性条件下LPA提高细胞的排酸能力 | 第45-46页 |
| 3.3.3 酸性条件下干扰LPAR2会降低细胞的排酸能力 | 第46-47页 |
| 3.3.4 小结 | 第47页 |
| 3.4 胃癌细胞中LPA抗酸诱导凋亡的信号通路 | 第47-51页 |
| 3.4.1 LPAR2促进Akt表达量 | 第47-48页 |
| 3.4.2 LPAR2促进ERK表达量 | 第48-49页 |
| 3.4.3 LPAR2对NF-κB表达量无影响 | 第49-50页 |
| 3.4.4 小结 | 第50-51页 |
| 第四章 讨论 | 第51-55页 |
| 4.1 LPA抗酸性诱导的细胞凋亡 | 第51-52页 |
| 4.2 LPA抗酸性凋亡与乳酸含量的关系 | 第52-53页 |
| 4.3 展望 | 第53-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第61页 |
