| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 符号说明 | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1.1 黄酮类化合物 | 第10-11页 |
| 1.1.1 黄酮类化合物的简介 | 第10-11页 |
| 1.1.2 黄酮类化合物的生理活性 | 第11页 |
| 1.2 芹菜素的研究概况 | 第11-16页 |
| 1.2.1 芹菜素的简介 | 第11-12页 |
| 1.2.2 芹菜素的生理活性 | 第12-13页 |
| 1.2.3 黄酮类化合物的生物合成途径 | 第13-14页 |
| 1.2.4 芹菜素的获取途径 | 第14-16页 |
| 1.3 芹菜素合成路径中关键酶的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.3.1 4-香豆酰辅酶A连接酶 | 第16-17页 |
| 1.3.2 查尔酮合酶 | 第17页 |
| 1.3.3 查尔酮异构酶 | 第17-18页 |
| 1.3.4 黄酮合酶 | 第18页 |
| 1.4 选题目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-33页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第19页 |
| 2.2 仪器与设备 | 第19-20页 |
| 2.3 实验方法 | 第20-33页 |
| 2.3.1 植物的培养和植物组织RNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.3.2 关键酶基因的克隆与重组表达载体的构建 | 第21-27页 |
| 2.3.3 在大肠杆菌体内鉴定关键酶的活性 | 第27-29页 |
| 2.3.4 重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第29-30页 |
| 2.3.5 体外4-香豆酸合成柚皮素方法的建立 | 第30-31页 |
| 2.3.6 体外柚皮素合成芹菜素方法的建立 | 第31页 |
| 2.3.7 体外4-香豆酸合成芹菜素方法的建立 | 第31页 |
| 2.3.8 4-香豆酸合成芹菜素的体外反应体系的优化 | 第31-33页 |
| 第三章 结果与分析 | 第33-62页 |
| 3.1 4-香豆酸合成芹菜素途径中四种关键酶基因的克隆 | 第33-42页 |
| 3.1.1 4CL1(gm)的克隆及pET-32a-4CL1(gm)的构建 | 第33-34页 |
| 3.1.2 CHS2(sb)的克隆及pET-32a-CHS2(sb)的构建 | 第34-36页 |
| 3.1.3 CHI(gm)的克隆及pET-32a-CHI(gm)的构建 | 第36-38页 |
| 3.1.4 FNSI(ag)的克隆及pET-32a-FNSI(ag)的构建 | 第38-39页 |
| 3.1.5 pCDFDuet-1-4CL1(gm)和pETDuet-1-CHS2(sb)-CHI(gm)的构建 | 第39-42页 |
| 3.2 在大肠杆菌体内鉴定4种关键酶的活性 | 第42-44页 |
| 3.2.1 Western blotting检测4CL1(gm)、CHS2(sb)、CHI(gm)蛋白的表达 | 第42页 |
| 3.2.2 体内鉴定四种关键酶的活性 | 第42-44页 |
| 3.3 融合蛋白的表达 | 第44-49页 |
| 3.3.1 His-4CL1(gm)融合蛋白的表达 | 第44-45页 |
| 3.3.2 His-CHS2(sb)融合蛋白的表达 | 第45-46页 |
| 3.3.3 His-CHI(gm)融合蛋白的表达 | 第46-47页 |
| 3.3.4 His-FNSI(ag)融合蛋白的表达 | 第47-48页 |
| 3.3.5 融合蛋白的纯化与SDS-PAGE鉴定 | 第48-49页 |
| 3.4 体外反应体系的建立 | 第49-62页 |
| 3.4.1 4-香豆酸合成柚皮素体系的建立 | 第49-51页 |
| 3.4.2 柚皮素合成芹菜素的反应体系的建立 | 第51-53页 |
| 3.4.3 4-香豆酸合成芹菜素反应体系的建立 | 第53-55页 |
| 3.4.4 优化4-香豆酸合成芹菜素反应体系的成分 | 第55-57页 |
| 3.4.5 优化4-香豆酸合成芹菜素反应体系的时间 | 第57-58页 |
| 3.4.6 优化4-香豆酸合成芹菜素反应体系的pH值 | 第58-59页 |
| 3.4.7 优化4-香豆酸合成芹菜素反应体系的温度 | 第59-60页 |
| 3.4.8 优化4-香豆酸合成芹菜素反应体系的底物浓度 | 第60-61页 |
| 3.4.9 优化前后反应的对比 | 第61-62页 |
| 第四章 讨论 | 第62-65页 |
| 第五章 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 附录 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第76-77页 |
