| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第11-18页 |
| 1.1 PD-1 与其配体PD-L1的发现及分布 | 第11页 |
| 1.2 PD-1 及其配体PD-L1的结构和功能 | 第11-13页 |
| 1.3 PD-1/PD-L1通路的生物学功能 | 第13-16页 |
| 1.3.1 PD-1/PD-L1通路在自身免疫性疾病中的作用 | 第13-14页 |
| 1.3.2 PD-1/PD-L1通路在慢性病毒感染中的作用 | 第14-15页 |
| 1.3.3 PD-1/PD-L1通路在抗肿瘤免疫中的作用 | 第15-16页 |
| 1.4 猪PD-1 及其配体的研究进展 | 第16页 |
| 1.5 研究背景与立题意义 | 第16-17页 |
| 1.6 本论文的研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 抗猪PD-1 及PD-L1单克隆抗体的制备及鉴定 | 第18-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-23页 |
| 2.1.1 免疫原 | 第18页 |
| 2.1.2 实验动物和细胞 | 第18页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第18-20页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第20页 |
| 2.1.5 溶液的配制 | 第20-23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-32页 |
| 2.2.1 免疫原的制备 | 第23页 |
| 2.2.2 动物免疫 | 第23-24页 |
| 2.2.3 免疫小鼠效价检测 | 第24页 |
| 2.2.4 NS0骨髓瘤细胞的复苏与培养 | 第24-25页 |
| 2.2.5 饲养细胞的制备 | 第25页 |
| 2.2.6 脾细胞悬液的制备 | 第25-26页 |
| 2.2.7 细胞融合 | 第26页 |
| 2.2.8 融合细胞的培养 | 第26页 |
| 2.2.9 阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第26-27页 |
| 2.2.10 杂交瘤细胞的克隆 | 第27-28页 |
| 2.2.11 单克隆抗体的大量制备 | 第28页 |
| 2.2.12 单克隆抗体的纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.13 单克隆抗体特异性鉴定 | 第29-32页 |
| 2.2.13.1 单克隆抗体的交叉反应性鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.13.2 Western-blot试验鉴定单克隆抗体的特异性 | 第30-32页 |
| 2.2.14 杂交瘤细胞的冻存和复苏 | 第32页 |
| 2.2.14.1 杂交瘤细胞的冻存 | 第32页 |
| 2.2.14.2 杂交瘤细胞的复苏 | 第32页 |
| 2.3 实验结果 | 第32-37页 |
| 2.3.1 间接ELISA检测小鼠免疫血清效价 | 第32-33页 |
| 2.3.2 细胞融合及杂交瘤细胞的培养 | 第33-35页 |
| 2.3.2.1 NS0细胞的培养 | 第33页 |
| 2.3.2.2 饲养细胞的制备 | 第33-34页 |
| 2.3.2.3 融合细胞的培养 | 第34-35页 |
| 2.3.2.4 克隆化检测结果 | 第35页 |
| 2.3.3 单克隆抗体特异性鉴定 | 第35-37页 |
| 2.3.3.1 间接ELISA鉴定结果 | 第35-36页 |
| 2.3.3.2 Western-blotting试验结果 | 第36-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-41页 |
| 2.4.1 小鼠免疫 | 第37-38页 |
| 2.4.2 细胞融合 | 第38-39页 |
| 2.4.3 单抗的筛选与检测 | 第39页 |
| 2.4.4 单抗的大量制备 | 第39-40页 |
| 2.4.5 单克隆抗体的鉴定 | 第40-41页 |
| 第三章 抗猪PD-1 及PD-L1单克隆抗体的生物学特性鉴定 | 第41-49页 |
| 3.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 细胞与蛋白 | 第41页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第41页 |
| 3.1.3 所用仪器设备 | 第41-42页 |
| 3.1.4 主要溶液配置 | 第42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-44页 |
| 3.2.1 单抗亚类鉴定 | 第42-43页 |
| 3.2.2 单抗效价检测 | 第43页 |
| 3.2.3 杂交瘤细胞株的稳定性检测 | 第43-44页 |
| 3.2.4 单抗与PBMC的结合 | 第44页 |
| 3.3 实验结果分析 | 第44-47页 |
| 3.3.1 单克隆抗体亚型的鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3.2 细胞培养上清和腹水效价检测 | 第45-46页 |
| 3.3.3 杂交瘤细胞的稳定性鉴定 | 第46页 |
| 3.3.4 单抗与PBMC的反应性 | 第46-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-49页 |
| 3.4.1 单克隆抗体亚型鉴定 | 第47-48页 |
| 3.4.2 杂交瘤细胞的稳定性 | 第48页 |
| 3.4.3 单抗与PBMC的结合 | 第48-49页 |
| 第四章 结论与展望 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 附录：英文缩写词汇表 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文及研究成果 | 第57页 |
