| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 英文缩写表 | 第7-11页 |
| 1 引言 | 第11-13页 |
| 2 材料与方法 | 第13-29页 |
| 2.1 试验仪器及试验耗材 | 第13页 |
| 2.1.1 试验仪器设备 | 第13页 |
| 2.1.2 试验试剂耗材 | 第13页 |
| 2.2 试验材料 | 第13-14页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第13页 |
| 2.2.2 供试菌株 | 第13-14页 |
| 2.2.3 载体 | 第14页 |
| 2.3 培养基及药品配制 | 第14-15页 |
| 2.3.1 培养基配制 | 第14-15页 |
| 2.3.2 试验药品配制 | 第15页 |
| 2.4 水杨酸含量的测定 | 第15-16页 |
| 2.4.1 植物材料采集 | 第15页 |
| 2.4.2 水杨酸提取 | 第15-16页 |
| 2.4.3 HPLC测定水杨酸含量 | 第16页 |
| 2.5 实时定量检测基因相对表达水平 | 第16-19页 |
| 2.5.1 植物材料采集 | 第16页 |
| 2.5.2 RNA提取、纯化及cDNA合成 | 第16-18页 |
| 2.5.3 实时定量引物设计 | 第18页 |
| 2.5.4 实时定量PCR | 第18页 |
| 2.5.5 数据处理及分析 | 第18-19页 |
| 2.6 RNAi载体构建 | 第19-23页 |
| 2.6.1 引物设计 | 第19页 |
| 2.6.2 载体构建流程 | 第19-23页 |
| 2.7 农杆菌介导的遗传转化 | 第23-24页 |
| 2.7.1 小麦愈伤组织的制备 | 第23页 |
| 2.7.2 农杆菌侵染 | 第23页 |
| 2.7.3 转基因植株的获得 | 第23-24页 |
| 2.8 遗传转化阳性植株的鉴定 | 第24-27页 |
| 2.8.1 转化植株中报告基因的PCR检测 | 第24-25页 |
| 2.8.2 Southern blot检测抗性基因 | 第25-27页 |
| 2.8.3 转录水平检测基因的沉默效率 | 第27页 |
| 2.9 叶锈菌侵染Ta EDS1 RNAi阳性植株的细胞学观察 | 第27-29页 |
| 2.9.1 植物材料采集 | 第27页 |
| 2.9.2 HR的染色 | 第27-28页 |
| 2.9.3 观察 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-40页 |
| 3.1 小麦与叶锈菌互作过程中水杨酸含量的变化 | 第29-30页 |
| 3.2 RT-qPCR检测Ta ICS和TaPAL基因的相对表达水平 | 第30-31页 |
| 3.3 TaEDS1 和TaICS RNAi载体的构建 | 第31-35页 |
| 3.3.1 目的片段的扩增 | 第31-33页 |
| 3.3.2 双酶切验证TaEDS1 和TaICS RNAi载体 | 第33-35页 |
| 3.4 转基因阳性植株的鉴定 | 第35-38页 |
| 3.4.1 农杆菌介导的遗传转化 | 第35-36页 |
| 3.4.2 PCR检测阳性植株 | 第36-37页 |
| 3.4.3 PCR阳性植株的Southern-blotting验证 | 第37页 |
| 3.4.4 沉默基因转录水平检测 | 第37-38页 |
| 3.5 沉默TaEDS1 对不亲和组合的HR面积及菌发育的影响 | 第38-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 4.1 在单子叶植物抗病过程中EDS1 的作用 | 第40页 |
| 4.2 SA在小麦抵抗叶锈菌侵染中的作用 | 第40-41页 |
| 4.3 展望 | 第41-42页 |
| 5 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-46页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第46-47页 |
| 作者简历 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
