| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第13-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-40页 |
| 1.1 猪链球病的概述 | 第14-27页 |
| 1.1.1 流行病学 | 第14-17页 |
| 1.1.2 病原学 | 第17-18页 |
| 1.1.3 猪链球菌2型病致病机制 | 第18-23页 |
| 1.1.4 临床症状及病理变化 | 第23-26页 |
| 1.1.5 诊断 | 第26-27页 |
| 1.1.6 防治 | 第27页 |
| 1.2 猪链球菌2型新型毒力因子 | 第27-36页 |
| 1.2.1 双组份调控系统 | 第28-30页 |
| 1.2.2 Rgg转录调控因子 | 第30-31页 |
| 1.2.3 分解代谢控制蛋白A(CcpA) | 第31页 |
| 1.2.4 自溶素Atl | 第31-32页 |
| 1.2.5 胶原1型结合蛋白cbp40 | 第32页 |
| 1.2.6 丝氨酸/苏氨酸激酶(STK) | 第32-33页 |
| 1.2.7 金属绑定脂蛋白TroA | 第33页 |
| 1.2.8 毒力相关基因virA | 第33页 |
| 1.2.9 H因子结合表面蛋白HP0272(Fhb) | 第33-34页 |
| 1.2.10 调节因子PerR | 第34-36页 |
| 1.3 猪链球菌2型疫苗的研究进展 | 第36-40页 |
| 1.3.1 灭活苗 | 第36-38页 |
| 1.3.2 基因工程活载体疫苗 | 第38-39页 |
| 1.3.3 活菌苗 | 第39-40页 |
| 第2章 研究的目的和意义 | 第40-42页 |
| 第3章 材料与方法 | 第42-60页 |
| 3.1 试验材料 | 第42-47页 |
| 3.1.1 菌株、质粒及培养条件 | 第42-43页 |
| 3.1.2 主要药品、试剂及仪器 | 第43页 |
| 3.1.3 培养基与抗生素及其配制 | 第43-44页 |
| 3.1.4 缓冲液 | 第44-45页 |
| 3.1.5 引物 | 第45-46页 |
| 3.1.6 实验动物 | 第46-47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-60页 |
| 3.2.1 猪链球菌2型的复苏 | 第47页 |
| 3.2.2 猪链球菌2型基因组的提取 | 第47-48页 |
| 3.2.3 PCR扩增 | 第48页 |
| 3.2.4 PCR或酶切产物的回收与纯化 | 第48-49页 |
| 3.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第49页 |
| 3.2.6 连接产物的转化 | 第49-50页 |
| 3.2.7 质粒的小量制备(改良的碱裂解法) | 第50页 |
| 3.2.8 质粒的大量制备(碱裂解法) | 第50-51页 |
| 3.2.9 重组质粒的鉴定 | 第51页 |
| 3.2.10 猪链球菌2型的电转化 | 第51-52页 |
| 3.2.11 基因缺失突变株的筛选 | 第52-53页 |
| 3.2.12 基因缺失突变株RNA的提取 | 第53-54页 |
| 3.2.13 基因缺失突变株的生物学特性研究 | 第54-55页 |
| 3.2.14 基因缺失突变株对小鼠致病力分析 | 第55-56页 |
| 3.2.15 基因缺失突变株感染小鼠后炎症因子的检测 | 第56页 |
| 3.2.16 双基因缺失突变株△SsPepO/△SsPspC对小鼠的免疫效力试验 | 第56-58页 |
| 3.2.17 双基因缺失突变株△SsPepO/△SsPspC对仔猪的安全性及免疫效力试验 | 第58-59页 |
| 3.2.18 数据分析 | 第59-60页 |
| 第4章 结果与分析 | 第60-95页 |
| 4.1 SsPepO与SsPspC基因生物信息学相关分析 | 第60-61页 |
| 4.2 温敏型自杀性重组质粒pSET4s-△SsPspC的构建与鉴定 | 第61-62页 |
| 4.3 基因缺失突变株的筛选和鉴定 | 第62-68页 |
| 4.3.1 单基因缺失突变株△SsPspC的筛选与鉴定 | 第62-65页 |
| 4.3.2 单基因缺失突变株△SsPepO的鉴定 | 第65页 |
| 4.3.3 双基因缺失突变株△SsPepO/△SsPspC的筛选与鉴定 | 第65-68页 |
| 4.4 基因缺失突变株生物学特性及致病性研究 | 第68-80页 |
| 4.4.1 基因缺失突变株遗传稳定性分析 | 第68-69页 |
| 4.4.2 基因缺失突变株生长特性研究 | 第69-70页 |
| 4.4.3 基因缺失突变株溶血活性研究 | 第70页 |
| 4.4.4 基因缺失突变株透射电镜观察 | 第70-71页 |
| 4.4.5 基因缺失突变株突变株半数致死量(LD_(50))的测定 | 第71-72页 |
| 4.4.6 基因缺失突变株对Balb/c小鼠发病率及存活率试验 | 第72-73页 |
| 4.4.7 基因缺失突变株感染组织载菌量测定 | 第73-74页 |
| 4.4.8 基因缺失突变株感染小鼠后炎症因子的检测 | 第74-78页 |
| 4.4.9 组织病理学分析 | 第78-80页 |
| 4.5 双基因缺失突变株△SsPepO/△SsPspC对小鼠的免疫效力试验 | 第80-85页 |
| 4.5.1 小鼠抗体水平评价 | 第80页 |
| 4.5.2 双基因缺失突变株△SsPepO/△SsPspC诱导小鼠抗体IgG亚类分析 | 第80-81页 |
| 4.5.3 淋巴细胞增殖试验 | 第81-82页 |
| 4.5.4 细胞因子的测定 | 第82页 |
| 4.5.5 全血杀菌试验 | 第82-83页 |
| 4.5.6 攻毒保护试验 | 第83-84页 |
| 4.5.7 被动免疫保护试验 | 第84页 |
| 4.5.8 组织病理学分析 | 第84-85页 |
| 4.6 双基因缺失突变株△SsPepO/△SsPspC对仔猪的免疫效力试验 | 第85-95页 |
| 4.6.1 双基因缺失突变株△SsPepO/△SsPspC对仔猪的安全性试验 | 第85-86页 |
| 4.6.2 免疫仔猪抗体水平检测 | 第86-87页 |
| 4.6.3 双基因缺失突变株△SsPepO/△SsPspC诱导仔猪抗体IgG亚类分析 | 第87页 |
| 4.6.4 全血杀菌试验 | 第87-88页 |
| 4.6.5 免疫攻毒后的保护效果 | 第88-92页 |
| 4.6.6 免疫保护效力评价 | 第92-93页 |
| 4.6.7 组织病理学分析 | 第93-95页 |
| 第5章 讨论 | 第95-100页 |
| 5.1 目的基因SsPepO和SsPspC的选择 | 第95-96页 |
| 5.2 选择温敏型自杀性重组质粒构建基因缺失突变株的策略 | 第96-97页 |
| 5.3 MCP-1、IL-8、IL-6、IL-1β、TNF-α炎症因子选择及结果分析 | 第97-98页 |
| 5.4 以Balb/c小鼠为模型探讨SsPepO和SsPspC致病机制的依据及缺陷 | 第98-99页 |
| 5.5 双基因缺失突株△SsPepO/△SsPspC免疫机制的初步探讨 | 第99-100页 |
| 第6章 结论 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 附录 | 第116页 |
