| 中文摘要 | 第4-6页 |
| 英文摘要 | 第6-7页 |
| 第一部分 引言 | 第11-38页 |
| 一、秀丽隐杆线虫概述 | 第11-13页 |
| 二、衰老理论与特征 | 第13-25页 |
| （一）衰老相关理论与发展 | 第13页 |
| （二）程序性衰老的理论 | 第13-14页 |
| （三）氧化应激损伤理论 | 第14-15页 |
| （四）基因组自身稳定性理论 | 第15-16页 |
| （五）衰老的特征 | 第16-25页 |
| 三、衰老相关的信号通路 | 第25-30页 |
| （一）Insulin/IGF-1 信号通路 | 第26-27页 |
| （二）TOR信号通路 | 第27-29页 |
| （三）生殖腺信号通路 | 第29-30页 |
| 四、O-GlcNAc修饰及生物学功能 | 第30-33页 |
| （一）O-GlcNAc修饰 | 第30-31页 |
| （二）O-GlcNAc修饰的生物学功能 | 第31-33页 |
| 五、SKN-1/Nrf蛋白及生物学功能 | 第33-36页 |
| （一）SKN-1/Nrf蛋白 | 第33页 |
| （二）SKN-1/Nrf蛋白的生物学功能 | 第33-34页 |
| （三）SKN-1/Nrf蛋白的翻译后修饰及其对自身功能的影响 | 第34-36页 |
| 六、本论文研究内容及意义 | 第36-38页 |
| （一）立题依据 | 第36-37页 |
| （二）研究内容及意义 | 第37-38页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第38-58页 |
| 一、实验材料 | 第38-42页 |
| （一）实验仪器 | 第38-39页 |
| （二）试剂 | 第39-40页 |
| （三）抗体 | 第40页 |
| （四）质粒 | 第40-41页 |
| （五）秀丽隐杆线虫品系 | 第41-42页 |
| 二、实验方法 | 第42-58页 |
| Ⅰ、秀丽隐杆线虫相关实验方法 | 第42-47页 |
| （一）秀丽隐杆线虫的培养 | 第42-44页 |
| （二）寿命分析 | 第44页 |
| （三）氧化压力分析 | 第44页 |
| （四）RNAi | 第44-45页 |
| （五）获取转基因线虫品系 | 第45页 |
| （六）线虫SKN-1B/C::GFP荧光蛋白的细胞定位检测 | 第45-46页 |
| （七）线虫ROS含量检测 | 第46-47页 |
| Ⅱ、分子生物学实验方法 | 第47-57页 |
| （一）质粒的构建 | 第47页 |
| （二）质粒的提取 | 第47页 |
| （三）mRNA提取，逆转录反应和Q-RT (Real-time)PCR | 第47-49页 |
| （四）蛋白质样品提取与制备 | 第49页 |
| （五）蛋白质免疫印迹（Western Blot） | 第49-51页 |
| （六）蛋白质免疫沉淀与共沉淀（IP,Co-IP） | 第51页 |
| （七）GST重组蛋白的诱导，表达及纯化 | 第51-53页 |
| （八）GST pull down实验 | 第53页 |
| （九）体外O-GlcNAc修饰反应体系 | 第53-54页 |
| （十）蛋白的O-GlcNAc修饰位点ESI质谱检测 | 第54-55页 |
| （十一）体外磷酸激酶反应 | 第55页 |
| （十二）抗体的制备与纯化 | 第55-56页 |
| （十三）ELISA（酶联免疫吸附）实验 | 第56-57页 |
| （十四）Dot-Blot实验 | 第57页 |
| Ⅲ、统计分析 | 第57-58页 |
| 第三部分 实验结果与分析 | 第58-77页 |
| 一、O-GlcNAc修饰水平的变化影响SKN-1B/C::GFP蛋白在肠道细胞核的定位及靶基因的表达 | 第58-62页 |
| （一）O-GlcNAc修饰水平的提高促进SKN-1B/C::GFP蛋白定位到肠道细胞核中 | 第58-59页 |
| （二）在氧化应激条件下， O-GlcNAc修饰水平的下降部分抑制SKN-1B/C::GFP蛋白在肠道细胞核中的定位 | 第59-61页 |
| （三）O-GlcNAc修饰水平的提高促进SKN-1 靶基因的表达 | 第61-62页 |
| 二、OGT-1 蛋白通过与SKN-1 相互结合对其进行O-GlcNAc修饰 | 第62-65页 |
| （一）SKN-1 蛋白与OGT-1 蛋白存在相互结合 | 第62-63页 |
| （二）OGT-1 蛋白对SKN-1 蛋白进行O-GlcNAc修饰 | 第63-64页 |
| （三）OGA-1 蛋白与OGT-1 蛋白功能的缺失影响SKN-1 蛋白的O-GlcNAc修饰水平 | 第64-65页 |
| 三、Thr470和Ser493是SKN-1 蛋白主要的O-GlcNAc修饰位点 | 第65-67页 |
| （一）质谱检测发现5个SKN-1 蛋白的O-GlcNAc修饰位点 | 第65-67页 |
| （二）Ser470和Thr493是SKN-1 蛋白主要的O-GlcNAc修饰位点 | 第67页 |
| 四、Ser470和Thr493的O-GlcNAc修饰可以促进SKN-1 蛋白的活性 | 第67-72页 |
| （一） Ser470和Thr493的O-GlcNAc修饰促进SKN-1B/C::GFP蛋白定位到肠道细胞核中 | 第67-69页 |
| （二）Ser470和Thr493的O-GlcNAc修饰影响线虫抗氧化应激的能力 | 第69-70页 |
| （三）Ser470和Thr493的O-GlcNAc修饰影响线虫的寿命 | 第70-72页 |
| 五、氧化应激激活SKN-1 蛋白的O-GlcNAc修饰并抑制GSK-3 对SKN-1 蛋白活性的调控 | 第72-77页 |
| （一）氧化应激促进SKN-1 蛋白与OGT-1 蛋白的结合，并增强SKN-1 蛋白的O-GlcNAc修饰水平 | 第72页 |
| （二） 氧化应激引起的SKN-1 的O-GlcNAc修饰水平的升高抑制GSK-3 对SKN-1蛋白Ser483的磷酸化修饰 | 第72-75页 |
| （三）SKN-1 蛋白的O-GlcNAc修饰影响GSK-3 对SKN-1 蛋白的肠细胞定位的调控作用 | 第75-77页 |
| 第四部分 讨论 | 第77-81页 |
| 一、哺乳动物中，SKN-1 蛋白同源物Nrf2蛋白的O-GlcNAc修饰 | 第77-78页 |
| 二、SKN-1 的O-GlcNAc修饰不影响SKN-1 蛋白在神经元ASI处的积累 | 第78-79页 |
| 三、SKN-1 蛋白的O-GlcNAc修饰与其靶基因的调控 | 第79页 |
| 四、SKN-1 蛋白O-GlcNAc修饰与磷酸化修饰之间的相互关系 | 第79-80页 |
| 五、SKN-1 蛋白的O-GlcNAc修饰调控线虫的衰老 | 第80-81页 |
| 主要结论和创新点 | 第81-82页 |
| 一、主要结论 | 第81页 |
| 二、创新点 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-100页 |
| 附录一 | 第100-102页 |
| 附录二 | 第102-104页 |
| 附录三 | 第104-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第108页 |
