| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第11-18页 |
| 1.1 人绒毛膜促性腺激素的简介 | 第11-12页 |
| 1.2 人绒毛膜促性腺激素的研究背景 | 第12页 |
| 1.3 人绒毛膜促性腺激素的进展 | 第12-14页 |
| 1.4 人绒毛膜促性腺激素的作用 | 第14-16页 |
| 1.4.1 人绒毛膜促性腺激素对疾病的诊断作用 | 第14-15页 |
| 1.4.2 人绒毛膜促性腺激素肿瘤中的作用 | 第15-16页 |
| 1.5 大肠杆菌表达系统概述 | 第16页 |
| 1.6 pGEX-4T-1 载体 | 第16-17页 |
| 1.7 本课题研究内容及意义 | 第17-18页 |
| 第2章 人绒毛膜促性腺激素表达载体的构建 | 第18-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第18页 |
| 2.1.2 培养基和溶液 | 第18-19页 |
| 2.1.3 试剂盒、仪器设备 | 第19-20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-32页 |
| 2.2.1 菌种的培养和保藏 | 第20页 |
| 2.2.2 DH5α 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第20-21页 |
| 2.2.3 人绒毛膜促性腺激素的提取 | 第21-24页 |
| 2.2.4 PGEX-4T-1 载体质粒的提取 | 第24-27页 |
| 2.2.5 表达型PGEX-4T-1 载体质粒的酶切及纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.6 目的片段HCG双酶切及纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.7 PGEX-4T-1 与PCR-HCG的连接反应 | 第29页 |
| 2.2.8 重组子转化 | 第29-31页 |
| 2.2.9 重组质粒的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3 实验结果 | 第32-42页 |
| 2.3.1 质粒提取后实验结果 | 第32-34页 |
| 2.3.2 HCG PCR扩增结果 | 第34-35页 |
| 2.3.3 PGEX-4T-1 酶切以及纯化后电泳结果 | 第35-36页 |
| 2.3.4 重组表达质粒鉴定 | 第36-42页 |
| 2.4 本章小结 | 第42-43页 |
| 第3章 重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第43-55页 |
| 3.1 实验材料及设备 | 第43-44页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第43页 |
| 3.1.2 培养基和溶液 | 第43-44页 |
| 3.1.3 试剂盒、仪器设备 | 第44页 |
| 3.2 实验方法 | 第44-51页 |
| 3.2.0 活化大肠杆菌BL2l(DE3) | 第44-45页 |
| 3.2.1 制备大肠杆菌BL2l(DE3)的感受态细胞 | 第45页 |
| 3.2.2 转化大肠杆菌BL21(DE3)，获得各自的表达菌株 | 第45页 |
| 3.2.3 种子液的制备 | 第45页 |
| 3.2.4 IPTG诱导表达 | 第45-46页 |
| 3.2.5 菌体破碎 | 第46页 |
| 3.2.6 SephadexG-100 层析 | 第46-47页 |
| 3.2.7 GST融合蛋白的表达与纯化 | 第47-48页 |
| 3.2.8 SDS-PAGE电泳 | 第48-49页 |
| 3.2.9 Westernblot印迹分析 | 第49-50页 |
| 3.2.10 活性分析 | 第50-51页 |
| 3.3 结果分析 | 第51-54页 |
| 3.3.1 重组质粒的转化 | 第51-52页 |
| 3.3.2 重组蛋白的聚丙烯酰胺及westernblot结果 | 第52-53页 |
| 3.3.3 重组蛋白的活性分析 | 第53-54页 |
| 3.4 本章小结 | 第54-55页 |
| 第4章 重组质粒表达条件的优化设计 | 第55-66页 |
| 4.1 主要仪器与材料 | 第56-57页 |
| 4.1.1 主要试剂及其配置 | 第56页 |
| 4.1.2 仪器设备与试剂盒 | 第56-57页 |
| 4.2 实验方法 | 第57-61页 |
| 4.2.1 改变培养基配方 | 第57页 |
| 4.2.2 改变培养温度 | 第57-58页 |
| 4.2.3 改变培养时间 | 第58页 |
| 4.2.4 改变诱导剂IPTG浓度 | 第58-59页 |
| 4.2.5 不同初始浓度菌种对目标蛋白表达的影响 | 第59-60页 |
| 4.2.6 菌液中沉淀包涵体的变性、复性 | 第60页 |
| 4.2.7 蛋白的表达与纯化 | 第60页 |
| 4.2.8 蛋白质的检测 | 第60-61页 |
| 4.3 结果与分析 | 第61-65页 |
| 4.3.1 标准曲线 | 第61-62页 |
| 4.3.2 培养基对大肠杆菌表达的影响 | 第62页 |
| 4.3.3 培养温度对大肠杆菌表达的影响 | 第62-63页 |
| 4.3.4 培养时间对大肠杆菌表达的影响 | 第63页 |
| 4.3.5 IPTG诱导剂浓度对大肠杆菌表达的影响 | 第63-64页 |
| 4.3.6 诱导前菌体密度对大肠杆菌表达的影响 | 第64页 |
| 4.3.7 经纯化、变性复性等处理后产物SDS--PAGE结果 | 第64-65页 |
| 4.4 本章小结 | 第65-66页 |
| 第5章 分析与讨论 | 第66-72页 |
| 5.1 表达系统的分析 | 第66-68页 |
| 5.2 表达产量的分析 | 第68-69页 |
| 5.3 表达后蛋白的活性分析 | 第69页 |
| 5.4 实验重点与难点 | 第69-71页 |
| 5.4.1 实验过程中遇到的问题 | 第70-71页 |
| 5.5 本章小结 | 第71-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 攻读硕士学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
