| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一部分 GBS毒力因子的初步晶体学研究 | 第12-58页 |
| 第一章 绪论 | 第12-20页 |
| 1.1 引言 | 第12-14页 |
| 1.1.1 B型链球菌概述 | 第12-13页 |
| 1.1.2 GBS毒力机制及毒力因子概述 | 第13-14页 |
| 1.2 β-haemolysin/cytolysin | 第14-17页 |
| 1.2.1 β-haemolysin/cytolysin概述 | 第14-15页 |
| 1.2.2 cyl操纵子 | 第15-17页 |
| 1.3 GBS pigment | 第17-19页 |
| 1.3.1 GBS pigment研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3.2 GBS pigment毒力机制 | 第18-19页 |
| 1.4 研究目的与研究意义 | 第19-20页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第20-40页 |
| 2.1 实验材料与仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.1.1 菌株和载体 | 第20页 |
| 2.1.2 酶与其它试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.2 生物信息学分析 | 第21页 |
| 2.3 B型链球菌相关毒力因子的基因克隆与重组质粒的构建 | 第21-29页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第21-22页 |
| 2.3.2 PCR反应及产物回收 | 第22-23页 |
| 2.3.3 双酶切法构建重组质粒 | 第23-25页 |
| 2.3.4 Gibson assembly法构建重组质粒 | 第25-26页 |
| 2.3.5 重组质粒转化感受态DH5α | 第26-28页 |
| 2.3.6 阳性克隆的筛选鉴定及质粒抽提 | 第28-29页 |
| 2.4 GBS毒力因子的表达与纯化 | 第29-35页 |
| 2.4.1 目的蛋白的表达检测与鉴定 | 第29-31页 |
| 2.4.2 目的蛋白的大量表达 | 第31-33页 |
| 2.4.3 目的蛋白的分离与纯化 | 第33-35页 |
| 2.4.4 浓缩、蛋白浓度测定 | 第35页 |
| 2.5 晶体学实验方法解析蛋白三维结构 | 第35-40页 |
| 2.5.1 蛋白结晶筛选 | 第35-37页 |
| 2.5.2 晶体冻存 | 第37-38页 |
| 2.5.3 衍射数据的收集 | 第38-39页 |
| 2.5.4 衍射数据的处理 | 第39-40页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第40-55页 |
| 3.1 GBS毒力因子的质粒构建与表达检测结果 | 第40页 |
| 3.2 GBS毒力因子的纯化 | 第40-49页 |
| 3.2.1 cylA蛋白的纯化结果 | 第40-43页 |
| 3.2.2 Maltose binding protein的纯化 | 第43-44页 |
| 3.2.3 SeMet-maltose binding protein的纯化 | 第44-45页 |
| 3.2.4 Oligopeptide binding protein的纯化 | 第45-46页 |
| 3.2.5 SeMet-Oligopeptide binding protein的纯化 | 第46-47页 |
| 3.2.6 Surface immunogenic protein的纯化 | 第47-48页 |
| 3.2.7 Putative pathogenicity protein的纯化 | 第48-49页 |
| 3.3 蛋白晶体的生长 | 第49-52页 |
| 3.3.1 Maltose binding protein晶体筛选与优化 | 第49-50页 |
| 3.3.2 Oligopeptide binding protein晶体初筛与优化 | 第50-51页 |
| 3.3.3 SeMet-Oligopeptide binding protein的初筛与优化 | 第51-52页 |
| 3.4 衍射数据的收集与处理 | 第52-55页 |
| 3.4.1 Maltose binding protein数据的收集与处理 | 第52-53页 |
| 3.4.2 Oligopeptide binding Protein的数据收集与处理 | 第53-55页 |
| 本篇小结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-58页 |
| 第二篇 免疫卡控点TIGIT抗原表位和抗体CDR序列的研究(合作项目) | 第58-83页 |
| 第四章 研究背景 | 第58-65页 |
| 4.1 免疫卡控点治疗 | 第58-60页 |
| 4.1.1 免疫卡控点CTLA-4和PD1 | 第58-59页 |
| 4.1.2 基于CTLA-和PD1的免疫治疗 | 第59-60页 |
| 4.2 新型免疫细胞表面抑制性受体TIGIT | 第60-62页 |
| 4.2.1 TIGIT研究背景介绍 | 第60-61页 |
| 4.2.2 TIGIT是极具潜力的免疫治疗的新靶点 | 第61-62页 |
| 4.3 TIGIT和CD226结构研究状况 | 第62-64页 |
| 4.4 研究目的与研究意义 | 第64-65页 |
| 第五章 实验方法 | 第65-72页 |
| 5.1 生物信息学获取 | 第65页 |
| 5.2 TIGIT与CD226分子克隆及重组质粒的构建 | 第65-66页 |
| 5.3 TIGIT与CD226蛋白的表达检测与大规模培养 | 第66页 |
| 5.4 重组蛋白的表达与纯化 | 第66-70页 |
| 5.4.1 mTIGIT IgV的表达纯化 | 第66-70页 |
| 5.4.2 hTIGIT蛋白的表达纯化 | 第70页 |
| 5.5 mTIGIT单克隆抗体的纯化 | 第70-72页 |
| 第六章 结果与讨论 | 第72-80页 |
| 6.1 mTIGIT蛋白的结果分析 | 第72-76页 |
| 6.1.1 mTIGIT氨基酸序列的生物信息学分析 | 第72-73页 |
| 6.1.2 mTIGIT基因的分子克隆与质粒构建 | 第73页 |
| 6.1.3 mTIGIT蛋白表达检测结果 | 第73-74页 |
| 6.1.4 mTIGIT的纯化结果 | 第74-75页 |
| 6.1.5 mTIGIT的质谱鉴定结果 | 第75-76页 |
| 6.2 hTIGIT蛋白的结果分析 | 第76-78页 |
| 6.2.1 hTIGIT的分子克隆与质粒构建 | 第76页 |
| 6.2.2 hTIGIT基因的表达检测 | 第76-77页 |
| 6.2.3 hTIGIT蛋白的纯化结果 | 第77-78页 |
| 6.3 mTIGIT单克隆抗体的纯化结果 | 第78-80页 |
| 本篇小结 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-83页 |
| 附录 | 第83-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
