| 摘要 | 第3-9页 |
| ABSTRACT | 第9-15页 |
| 前言 | 第18-21页 |
| 第一章 CYGB酵母诱饵表达载体的构建、表达与自毒性、自激活检测 | 第21-31页 |
| 1.1 材料 | 第21-24页 |
| 1.1.1 菌株、细胞株及质粒 | 第21页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第21-22页 |
| 1.1.4 溶液及培养基的配置 | 第22-24页 |
| 1.2 实验方法 | 第24-27页 |
| 1.2.1 pGBKT7-CYGB酵母诱饵表达质粒的构建、鉴定 | 第24-25页 |
| 1.2.2 pGBKT7-CYGB酵母诱饵表达质粒小规模转化Y2H Gold酵母菌株 | 第25-26页 |
| 1.2.3 CYGB诱饵蛋白在Y2H Gold酵母菌株中的Western-blot表达鉴定 | 第26-27页 |
| 1.2.4 诱饵蛋白在Y2H Gold酵母菌株中的自毒性、自激活检测 | 第27页 |
| 1.3 实验结果 | 第27-31页 |
| 1.3.1 pGBKT7-CYGB酵母诱饵表达质粒的双酶切、PCR鉴定 | 第27-28页 |
| 1.3.2 pGBKT7-CYGB酵母诱饵表达质粒的测序鉴定 | 第28-29页 |
| 1.3.3 诱饵蛋白的Western-blot表达鉴定结果 | 第29页 |
| 1.3.4 诱饵蛋白在Y2H Gold酵母菌株中的自毒性、自激活检测结果 | 第29-31页 |
| 第二章 酵母双杂交筛选与CYGB相互作用的蛋白 | 第31-44页 |
| 2.1 材料 | 第31-33页 |
| 2.1.1 菌株、细胞株及质粒 | 第31页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第31页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第31-32页 |
| 2.1.4 溶液及培养基的配置 | 第32-33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-37页 |
| 2.2.1 酵母双杂交阴阳性对照实验 | 第33-34页 |
| 2.2.2 运用酵母融合法进行酵母双杂交筛选 | 第34-35页 |
| 2.2.3 阳性克隆酵母文库质粒的提取 | 第35-36页 |
| 2.2.4 阳性克隆文库质粒的PCR和测序鉴定及比对分析 | 第36-37页 |
| 2.3 实验结果 | 第37-44页 |
| 2.3.1 酵母双杂交阴阳性对照实验结果 | 第37页 |
| 2.3.2 酵母双杂交筛选中三叶结构接合子形成结果图 | 第37-38页 |
| 2.3.3 酵母双杂交结果 | 第38-39页 |
| 2.3.4 酵母双杂交阳性克隆文库基因PCR产物电泳结果 | 第39-40页 |
| 2.3.5 酵母双杂交阳性克隆文库基因PCR产物测序、blast比对结果 | 第40-44页 |
| 第三章 细胞珠蛋白(CYGB)与环指蛋白2(RNF2)相互作用的验证 | 第44-54页 |
| 3.1 材料 | 第44-47页 |
| 3.1.1 菌株、细胞株及质粒 | 第44页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第44-45页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第45页 |
| 3.1.4 溶液及培养基的配置 | 第45-47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-50页 |
| 3.2.1 酵母回复性杂交验证CYGB与RNF2的相互作用 | 第47页 |
| 3.2.2 免疫共沉淀验证CYGB与RNF2的相互作用 | 第47-50页 |
| 3.3 实验结果 | 第50-54页 |
| 3.3.1 酵母回复性杂交验证CYGB与RNF2的相互作用结果 | 第50-51页 |
| 3.3.2 pCMV-MYC-CYGB哺乳动物细胞表达载体的双酶切、PCR鉴定 | 第51-52页 |
| 3.3.3 pCMV-MYC-CYGB哺乳动物细胞表达载体的测序鉴定 | 第52页 |
| 3.3.4 免疫共沉淀验证CYGB与RNF2的相互作用 | 第52-54页 |
| 第四章 过表达CYGB诱导人结肠癌HCT116细胞中RNF2及其相关基因的mRNA水平变化 | 第54-60页 |
| 4.1 材料 | 第54-55页 |
| 4.1.1 菌株、细胞株及质粒 | 第54页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第54页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第54-55页 |
| 4.1.4 溶液及培养基的配置 | 第55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-58页 |
| 4.2.1 细胞的培养与转染 | 第55-56页 |
| 4.2.2 RT-qPCR检测在人结肠癌HCT116细胞CYGB高表达组和对照组中CYGB、RNF2、P53、P21的mRNA水平 | 第56-58页 |
| 4.3 实验结果 | 第58-60页 |
| 4.3.1 qPCR结果分析 | 第58-60页 |
| 讨论 | 第60-65页 |
| 全文总结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-69页 |
| 英文缩略词表(Abbreviation) | 第69-71页 |
| 硕士期间发表论文情况 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
