| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 1 文献综述 | 第8-17页 |
| 1.1 基因编辑技术的概述 | 第8-9页 |
| 1.2 CRISPR/Cas系统 | 第9-15页 |
| 1.2.1 CRISPR/Cas系统的基本结构 | 第10-11页 |
| 1.2.2 CRISPR/Cas系统的作用机制 | 第11-12页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas系统的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.2.4 CRISPR/Cas系统的应用 | 第13-14页 |
| 1.2.5 CRISPR/Cas9在植物中的应用与存在的问题 | 第14-15页 |
| 1.3 研究背景 | 第15-16页 |
| 1.4 目的基因的生物学功能 | 第16-17页 |
| 2 引言 | 第17-19页 |
| 2.1 研究的目的与意义 | 第17页 |
| 2.2 课题研究内容 | 第17-18页 |
| 2.3 研究所采用的技术路线 | 第18-19页 |
| 3 材料与方法 | 第19-31页 |
| 3.1 实验材料及仪器设备 | 第19-20页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第19页 |
| 3.1.2 菌株与载体 | 第19页 |
| 3.1.3 酶及试剂 | 第19页 |
| 3.1.4 仪器设备 | 第19-20页 |
| 3.2 培养基、抗生素和主要试剂的配制 | 第20-21页 |
| 3.2.1 培养基的配制 | 第20-21页 |
| 3.2.2 抗生素存储液配制 | 第21页 |
| 3.2.3 激素储液配制 | 第21页 |
| 3.2.4 乙酰丁香酮的配制 | 第21页 |
| 3.3 实验方法 | 第21-31页 |
| 3.3.1 杨树PDS基因的鉴定以及敲除基因的确定 | 第21-22页 |
| 3.3.2 杨树和烟草敲除靶点的选择 | 第22-23页 |
| 3.3.3 片段扩增，获得sgRNA克隆框 | 第23-25页 |
| 3.3.4 线性化载体制备 | 第25页 |
| 3.3.5 重组酶整合 | 第25-26页 |
| 3.3.6 转化，筛选阳性克隆 | 第26-27页 |
| 3.3.7 重组载体转化农杆菌 | 第27-28页 |
| 3.3.8 重组载体转化杨树以及烟草，获得转基因苗 | 第28-30页 |
| 3.3.9 转基因苗的PCR检测 | 第30-31页 |
| 4 结果与分析 | 第31-40页 |
| 4.1 杨树PDS家族 | 第31-32页 |
| 4.2 靶点的选择 | 第32-33页 |
| 4.3 重组载体转化杨树，得到转基因杨树苗 | 第33-37页 |
| 4.4 转基因苗的PCR检测 | 第37-38页 |
| 4.5 转基因烟草、杨树的株型比较 | 第38-40页 |
| 5 讨论 | 第40-41页 |
| 6 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-47页 |
| 附录A 中英文缩写与注释 | 第47-48页 |
| 附录B 载体图谱以及CRISPR/Cas9工作原理示意图 | 第48-49页 |
| 附录C 设计相应载体的sgRNA区域 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 作者简介 | 第51页 |
| 攻读硕士期间的研究成果 | 第51页 |
