| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第7-8页 |
| ·酵母的糖基化 | 第8-11页 |
| ·毕赤酵母N-糖基人源化改造途径和研究进展 | 第11-13页 |
| ·基因工程改造 | 第11-12页 |
| ·诱变育种 | 第12-13页 |
| ·本课题的研究背景及研究内容 | 第13-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-27页 |
| ·材料 | 第15-18页 |
| ·菌种与质粒 | 第15页 |
| ·工具酶、抗体 | 第15页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第15-16页 |
| ·主要仪器 | 第16页 |
| ·培养基 | 第16-17页 |
| ·主要溶液 | 第17-18页 |
| ·方法 | 第18-27页 |
| ·诱变实验方法 | 第18页 |
| ·对P. pastoris X33诱变菌株生长情况的研究方法 | 第18-19页 |
| ·Mns ? 基因表达载体的构建 | 第19-21页 |
| ·重组表达载体导入P. pastoris X33诱变菌株 | 第21-23页 |
| ·P. pastoris X33 (MNS ?)菌株的细胞形态及生长情况 | 第23-24页 |
| ·GM-CSF在P. pastoris X33 (MNS ?)菌株中的表达 | 第24-25页 |
| ·Western blot分析检测 | 第25-26页 |
| ·GM-CSF蛋白的分离纯化和N-糖苷酶F (PNGaseF)酶切分析鉴定 | 第26-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-40页 |
| ·诱变实验富集结果 | 第27-28页 |
| ·紫外诱变实验富集结果 | 第27页 |
| ·ARTP诱变实验富集结果 | 第27-28页 |
| ·诱变实验富集结果 | 第28-32页 |
| ·菌株的生长情况 | 第28-29页 |
| ·温度对生长情况的影响 | 第29页 |
| ·菌株对渗透压的敏感性 | 第29-30页 |
| ·菌体形态观察 | 第30-31页 |
| ·菌株的存活率 | 第31-32页 |
| ·Mns ? 基因表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·Mns ? 基因的合成 | 第32-33页 |
| ·Mns ? 基因与表达载体相连 | 第33页 |
| ·重组表达载体导入P. pastoris X33诱变菌株 | 第33-34页 |
| ·P. pastoris X33 (MNS ?)菌株的细胞形态及生长情况 | 第34-35页 |
| ·报告蛋白GM-CSF表达菌株的鉴定 | 第35-36页 |
| ·GM-CSF在P. pastoris X-33 (Mns ?)菌株中的表达 | 第36-38页 |
| ·GM-CSF蛋白的分离纯化和N-糖苷酶F (PNGaseF)酶切分析鉴定 | 第38-40页 |
| 主要结论与展望 | 第40-42页 |
| 主要结论 | 第40-41页 |
| 展望 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-45页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第45页 |
