| 摘要 | 第1-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 文献综述 | 第13-24页 |
| 1 哺乳动物毛发的形成机制 | 第13-16页 |
| ·毛发及毛囊形成过程 | 第13-14页 |
| ·毛囊周期循环的分子调控机制 | 第14-16页 |
| ·生长期 | 第14-15页 |
| ·退行期 | 第15页 |
| ·休眠期 | 第15-16页 |
| 2 MICRORNA的研究现状及在动物皮肤中的调控作用 | 第16-20页 |
| ·MICRORNA的发生及作用机制 | 第16-17页 |
| ·MICRORNA与皮肤、毛囊发育 | 第17-18页 |
| ·LET-7研究进展 | 第18-20页 |
| ·let-7与秀丽隐杆线虫的发育 | 第18-19页 |
| ·let-7与细胞增殖与分化 | 第19页 |
| ·let-7与肿瘤 | 第19页 |
| ·let-7与毛发生长 | 第19-20页 |
| 3 TGF-B家族与哺乳动物的毛发形成 | 第20-23页 |
| ·TGF-B家族及信号转导通路 | 第20-21页 |
| ·TGF-B/SMADS通路与毛囊发育及毛发生长 | 第21-22页 |
| ·TGF-B/SMADS通路与MICRORNA | 第22-23页 |
| 4 研究意义和目的 | 第23-24页 |
| 实验一 LET-7B在羊驼皮肤组织中的检测 | 第24-29页 |
| 1 材料 | 第24-25页 |
| ·实验动物 | 第24页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第24-25页 |
| ·实验主要仪器设备 | 第24页 |
| ·试剂与耗材 | 第24-25页 |
| 2 方法 | 第25-26页 |
| ·TRIZOL法提取羊驼皮肤总RNA | 第25页 |
| ·荧光定量PCR法检测LET-7B在羊驼皮肤中的表达 | 第25-26页 |
| ·cDNA的合成反应 | 第25-26页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第26页 |
| 3 结果 | 第26-28页 |
| ·样本总RNA的鉴定 | 第26-27页 |
| ·LET-7B在羊驼皮肤中的表达检测 | 第27-28页 |
| 4 小结 | 第28-29页 |
| 实验二 TGFBR Ⅰ基因在羊驼耳部及背部皮肤表达差异分析 | 第29-34页 |
| 1 材料与方法 | 第29-31页 |
| ·实验材料 | 第29页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第29页 |
| ·实验主要仪器设备 | 第29页 |
| ·试剂与耗材 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-31页 |
| ·反转录合成cDNA | 第29-30页 |
| ·PCR引物设计及扩增 | 第30页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第30-31页 |
| 2 结果 | 第31-33页 |
| ·TGFBR Ⅰ基因扩增及序列比对 | 第31页 |
| ·TGFBR Ⅰ在羊驼耳部及背部皮肤MRNA表达差异 | 第31-33页 |
| 3 小结 | 第33-34页 |
| 实验三TGFBR Ⅰ蛋白在羊驼耳部及背部皮肤中的定位分析 | 第34-38页 |
| 1 材料 | 第34页 |
| ·实验动物和材料 | 第34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34页 |
| ·实验药品试剂与耗材 | 第34页 |
| 2 方法 | 第34-36页 |
| ·石蜡切片的制备 | 第34-35页 |
| ·组织修块 | 第34页 |
| ·脱水与透明 | 第34-35页 |
| ·组织浸蜡 | 第35页 |
| ·组织包埋 | 第35页 |
| ·切片 | 第35页 |
| ·免疫组织化学实验 | 第35页 |
| ·图像采集与数据分析 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-37页 |
| ·免疫组织化学实验结果 | 第36-37页 |
| 4 小结 | 第37-38页 |
| 实验四 TGFBR Ⅰ双荧光报告载体的构建 | 第38-44页 |
| 1 材料 | 第38-39页 |
| ·实验材料 | 第38页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第38-39页 |
| ·实验主要仪器设备 | 第38页 |
| ·试剂与耗材 | 第38-39页 |
| ·主要的质粒载体 | 第39页 |
| 2 方法 | 第39-42页 |
| ·构建羊驼TGFBR Ⅰ基因3'-UTR双荧光素报告载体 | 第39-41页 |
| ·cDNA的合成反应 | 第39页 |
| ·羊驼TGFβR Ⅰ基因3'-UTR部分片段的扩增 | 第39-40页 |
| ·TGFβR Ⅰ基因3'-UTR双荧光素报告载体的构建 | 第40-41页 |
| ·HEK293T细胞的培养及细胞转染 | 第41-42页 |
| ·质粒菌液的无内毒素质粒提取 | 第41页 |
| ·HEK293T细胞的培养 | 第41页 |
| ·质粒共转染HEK293T细胞及荧光素检测 | 第41-42页 |
| 3 结果 | 第42-43页 |
| ·PMIRGLO-TGFBR Ⅰ 3'-UTR重组质粒载体的构建 | 第42-43页 |
| ·双荧光素报告载体荧光检测 | 第43页 |
| 4 小结 | 第43-44页 |
| 实验五 TGFBR Ⅰ在羊驼成纤维细胞中的定位 | 第44-48页 |
| 1 材料 | 第44页 |
| ·实验材料 | 第44页 |
| ·主要仪器设备 | 第44页 |
| ·试剂与耗材 | 第44页 |
| 2 方法 | 第44-45页 |
| ·玻璃小片的制作 | 第44页 |
| ·四代羊驼皮肤成纤维细胞的培养 | 第44-45页 |
| ·羊驼皮肤成纤维细胞的复苏 | 第44页 |
| ·羊驼皮肤成纤维细胞的传代培养 | 第44-45页 |
| ·羊驼皮肤成纤维细胞的冻存 | 第45页 |
| ·细胞免疫化学实验步骤 | 第45页 |
| ·图像采集与数据分析 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-47页 |
| 4 小结 | 第47-48页 |
| 实验六 LET-7B在羊驼皮肤成纤维细胞中的过表达 | 第48-53页 |
| 1 材料 | 第48-49页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·主要的载体质粒 | 第48页 |
| ·实验主要仪器设备 | 第48页 |
| ·实验试剂及耗材 | 第48-49页 |
| 2 方法 | 第49-50页 |
| ·羊驼皮肤成纤维细胞的培养 | 第49页 |
| ·细胞复苏与冻存 | 第49页 |
| ·细胞传代培养 | 第49页 |
| ·LET-7B真核表达载体转染羊驼皮肤成纤维细胞 | 第49页 |
| ·羊驼成纤维细胞RNA的提取及cDNA的合成 | 第49-50页 |
| ·实时荧光定量PCR法检测LET-7B的表达量 | 第50页 |
| 3 结果 | 第50-52页 |
| ·羊驼成纤维细胞的转染 | 第50-51页 |
| ·LET-7B相对表达量的检测结果 | 第51-52页 |
| 4 小结 | 第52-53页 |
| 实验七 羊驼成纤维细胞TGFBR Ⅰ基因及蛋白表达量的检测 | 第53-59页 |
| 1 材料 | 第53页 |
| ·实验样本 | 第53页 |
| ·主要仪器设备 | 第53页 |
| ·试剂与耗材 | 第53页 |
| 2 方法 | 第53-56页 |
| ·羊驼皮肤成纤维细胞总RNA的提取及cDNA的合成 | 第53-54页 |
| ·实时荧光定量PCR法检测TGFBR Ⅰ基因 | 第54页 |
| ·羊驼皮肤成纤维细胞总蛋白的提取 | 第54页 |
| ·蛋白免疫印记实验(WESTERN BLOT)操作步骤 | 第54-56页 |
| ·蛋白样品制备 | 第54页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第54-55页 |
| ·蛋白完整性的检测 | 第55页 |
| ·转膜及抗体孵育 | 第55-56页 |
| ·蛋白免疫印记图像分析 | 第56页 |
| 3 结果 | 第56-58页 |
| ·TGFBR Ⅰ实时荧光定量PCR结果 | 第56-57页 |
| ·WESTERN BLOT结果 | 第57-58页 |
| 4 小结 | 第58-59页 |
| 讨论 | 第59-62页 |
| 1 TGFBR Ⅰ对羊驼毛囊周期循环及毛发生长的影响 | 第59页 |
| 2 LET-7B与TGFBR Ⅰ靶向关系的验证 | 第59-61页 |
| 3 LET-7B对TGFBR Ⅰ调控方式的探究 | 第61-62页 |
| 结论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| Abstract | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 在读期间发表论文 | 第76页 |
