| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 目录 | 第10-12页 |
| 缩略词 | 第12-13页 |
| 第一部分 前言 | 第13-23页 |
| ·酿酒酵母表达系统及其优缺点 | 第13-14页 |
| ·酿酒酵母表达系统 | 第13页 |
| ·酿酒酵母表达系统的优缺点 | 第13-14页 |
| ·常用疫苗 | 第14-16页 |
| ·减毒苗 | 第14-15页 |
| ·灭活疫苗 | 第15页 |
| ·亚单位疫苗 | 第15-16页 |
| ·核酸疫苗 | 第16-20页 |
| ·核酸疫苗的免疫机制 | 第16-17页 |
| ·影响核酸疫苗效果的因素 | 第17-18页 |
| ·DNA核酸疫苗 | 第18-19页 |
| ·DNA核酸疫苗的优点 | 第19页 |
| ·核酸疫苗存在的问题 | 第19-20页 |
| ·口服疫苗及酿酒酵母作为口服疫苗的研究 | 第20-21页 |
| ·口服疫苗 | 第20-21页 |
| ·酿酒酵母作为口服疫苗的研究 | 第21页 |
| ·研究内容和意义 | 第21-23页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第23-35页 |
| ·实验材料 | 第23-26页 |
| ·菌株和质粒 | 第23-24页 |
| ·菌株 | 第23页 |
| ·质粒 | 第23页 |
| ·细胞株 | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·主要引物 | 第24页 |
| ·主要酶和试剂 | 第24页 |
| ·仪器和设备 | 第24-25页 |
| ·主要缓冲液 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-35页 |
| ·质粒DNA抽提(SDS碱裂解法) | 第26-27页 |
| ·PCR反应体系 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(TB法) | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌常规转化 | 第28页 |
| ·鲑鱼精ssDNA的制备 | 第28页 |
| ·酿酒酵母感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·酿酒酵母LiAc-TE-PEG3350化学转化 | 第29页 |
| ·酿酒酵母基因组DNA的提取(NaCl法) | 第29-30页 |
| ·酿酒酵母重组菌株筛选 | 第30页 |
| ·重组酿酒菌株摇瓶表达 | 第30页 |
| ·哺乳动物细胞冻存以及复苏 | 第30-31页 |
| ·哺乳动物细胞RAW264.7、Hela等细胞系的传代培养 | 第31页 |
| ·质粒DNA转染Hela细胞 | 第31-32页 |
| ·NP40裂解液裂解细胞 | 第32页 |
| ·聚丙烯酰胺凝电泳 | 第32-33页 |
| ·Western blotting检测目的蛋白质的表达(半干转法) | 第33-34页 |
| ·小鼠皮下免疫注射及ELISA检测 | 第34页 |
| ·小鼠攻毒实验 | 第34-35页 |
| 第三部分 实验结果与讨论 | 第35-41页 |
| ·质粒pYES2-CMV-BGH-HA和pYES2-CMV-BGH-eGFP转化及抽提 | 第35页 |
| ·酿酒酵母INVScl的重组质粒的转化及转化子的鉴定 | 第35-37页 |
| ·pYES2-CMV-BGH-HA和pYES2-CMV-BGH-eGFP转化酿酒酵母INVSc1及总DNA的抽取 | 第35-36页 |
| ·酿酒酵母INVSc1转化子的PCR鉴定 | 第36-37页 |
| ·pYES2-CMV-BGH-eGFP转染哺乳动物细胞 | 第37-38页 |
| ·pYES2-CMV-BGH-eGFP在酿酒酵母中的启动情况 | 第38页 |
| ·小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬酿酒酵母转化子 | 第38-39页 |
| ·小鼠皮下注射免疫及ELISA检测 | 第39-40页 |
| ·小鼠攻毒试验 | 第40-41页 |
| 第四部分 结论与展望 | 第41-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 附录：攻读学位期间获得的研究成果 | 第48页 |
