| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 英文缩写词表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| ·黄病毒综述 | 第12-18页 |
| ·黄病毒的分类 | 第12-13页 |
| ·黄病毒的形态结构及理化性质 | 第13页 |
| ·黄病毒基因组的研究进展 | 第13-17页 |
| ·黄病毒结构蛋白 | 第14-16页 |
| ·黄病毒非结构蛋白 | 第16-17页 |
| ·黄病毒与家禽 | 第17-18页 |
| ·鸭坦布苏病毒研究进展 | 第18-23页 |
| ·鸭坦布苏病毒在国内的流行情况 | 第18页 |
| ·临床症状 | 第18-19页 |
| ·病理变化 | 第19-20页 |
| ·鸭坦布苏病毒理化及培养特性 | 第20-21页 |
| ·鸭坦布苏病毒的检测技术 | 第21-23页 |
| ·病毒分离 | 第21页 |
| ·RT-PCR技术 | 第21页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第21-22页 |
| ·环介导等温扩增检测技术 | 第22页 |
| ·病毒中和试验 | 第22页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第22-23页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 第二章 鸭坦布苏病毒NS1基因的克隆与生物信息学分析 | 第24-35页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·毒株与菌株 | 第24页 |
| ·实验试剂 | 第24页 |
| ·实验仪器 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-29页 |
| ·NS1基因引物的设计 | 第25页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·NS1基因的RT-PCR | 第26-27页 |
| ·反转录 | 第26页 |
| ·PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·PCR产物的回收与克隆 | 第27-28页 |
| ·PCR产物胶回收 | 第27页 |
| ·NS1基因的克隆 | 第27-28页 |
| ·pMD18T-NS1阳性质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| ·pMD18T-NS1质粒的提取 | 第28页 |
| ·pMD18T-NS1质粒的酶切 | 第28-29页 |
| ·坦布苏病毒非结构蛋白NS1的序列分析 | 第29页 |
| ·NS1蛋白的序列拼接 | 第29页 |
| ·NS1蛋白的基本理化特性 | 第29页 |
| ·NS1蛋白的抗原位点分析 | 第29页 |
| ·NS1蛋白核苷酸同源性比较 | 第29页 |
| ·NS1蛋白遗传进化分析 | 第29页 |
| ·结果与分析 | 第29-34页 |
| ·NS1基因RT-PCR结果 | 第29-30页 |
| ·质粒的双酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·质粒的PCR鉴定 | 第31页 |
| ·鸭坦布苏病毒NS1蛋白的序列分析 | 第31-34页 |
| ·NS1蛋白的理化性质分析 | 第31页 |
| ·NS1蛋白的抗原预测 | 第31-32页 |
| ·NS1蛋白的亲水性结构 | 第32页 |
| ·NS1蛋白的表面概率结构 | 第32页 |
| ·NS1蛋白的核苷酸同源性分析 | 第32-33页 |
| ·NS1蛋白的遗传进化分析 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| 第三章 鸭坦布苏病毒NS1蛋白的原核表达及纯化 | 第35-46页 |
| ·实验材料 | 第35-36页 |
| ·毒株和菌株 | 第35页 |
| ·主要试剂盒及生化试剂 | 第35页 |
| ·主要实验仪器 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-40页 |
| ·引物设计 | 第36页 |
| ·NS1基因的扩增 | 第36页 |
| ·PCR产物的回收与克隆 | 第36-37页 |
| ·pMD18T-NS1载体的鉴定 | 第37页 |
| ·原核表达载体pET32a-NS1的构建 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第38页 |
| ·诱导时间的优化 | 第38页 |
| ·IPTG浓度的优化 | 第38页 |
| ·诱导温度的优化 | 第38页 |
| ·重组表达蛋白的可溶性检测 | 第38-39页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第39页 |
| ·重组蛋白制备 | 第39页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第39页 |
| ·重组蛋白的Western-Blot鉴定 | 第39-40页 |
| ·结果与分析 | 第40-45页 |
| ·NS1基因RT-PCR结果 | 第40-41页 |
| ·pMD18T-NS1克隆质粒的鉴定 | 第41页 |
| ·pET32a-NS1表达质粒的鉴定 | 第41-42页 |
| ·诱导时间的优化 | 第42页 |
| ·IPTG浓度的优化 | 第42-43页 |
| ·诱导温度的优化 | 第43页 |
| ·重组蛋白的可溶性分析结果 | 第43-44页 |
| ·NS1蛋白纯化结果 | 第44页 |
| ·重组蛋白的Western Blot鉴定结果 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| 第四章 鸭坦布苏病毒NS1蛋白间接抗体捕获ELISA方法的建立与应用 | 第46-55页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·血清 | 第46页 |
| ·实验试剂 | 第46页 |
| ·溶液配制 | 第46页 |
| ·实验仪器 | 第46-47页 |
| ·试验方法 | 第47-49页 |
| ·鸭坦布苏病毒NS1间接抗体捕获ELISA的建立 | 第47-48页 |
| ·间接ELISA方法的基本程序 | 第47页 |
| ·抗原抗体最佳反应条件的确定 | 第47页 |
| ·血清最佳作用时间的确定 | 第47-48页 |
| ·酶标二抗最佳作用时间和浓度的确定 | 第48页 |
| ·最佳显色时间的确定 | 第48页 |
| ·血清阴阳性的判定 | 第48页 |
| ·间接ELISA方法的特异性试验 | 第48页 |
| ·间接ELISA方法的重复性试验 | 第48-49页 |
| ·批内重复试验 | 第48页 |
| ·批间重复试验 | 第48-49页 |
| ·间接ELISA的应用 | 第49页 |
| ·自然感染鸭与灭活苗免疫鸭血清的检测 | 第49页 |
| ·临床样品的检测 | 第49页 |
| ·结果与分析 | 第49-53页 |
| ·抗原和抗体最佳稀释浓度的确定 | 第49-50页 |
| ·血清最佳作用时间 | 第50页 |
| ·二抗最佳作用时间和浓度的确定 | 第50页 |
| ·最佳显色时间的确定 | 第50-51页 |
| ·血清阴阳性判定 | 第51页 |
| ·特异性试验 | 第51-52页 |
| ·批内重复性试验 | 第52页 |
| ·批间重复性实验 | 第52页 |
| ·自然感染鸭与疫苗免疫鸭血清的检测 | 第52-53页 |
| ·临床样品检测 | 第53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 全文结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 附录 | 第65页 |