| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 本研宄主要创新点 | 第11-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-46页 |
| 1. 蛋白酶 | 第16-21页 |
| ·蛋白酶概述 | 第16-18页 |
| ·氨酸蛋白酶 | 第18-20页 |
| ·Subtilases | 第20-21页 |
| ·嗜热蛋白酶 | 第21页 |
| 2. 蛋白酶N端前肽的功能 | 第21-26页 |
| ·N端前肽可以维持蛋白酶的无活性状态 | 第22页 |
| ·N端前肽能协助蛋白酶折叠 | 第22-24页 |
| ·N端前肽影响蛋白酶的转运和分泌 | 第24页 |
| ·N端前肽介导酶原与其他分子或超分子的相互作用 | 第24-25页 |
| ·N端前肽具有高变异性 | 第25-26页 |
| ·N端前肽与蛋白质记忆(Protein memory) | 第26页 |
| 3. 蛋白酶的加工成熟过程 | 第26-35页 |
| ·蛋白酶加工成熟过程的方式 | 第27页 |
| ·蛋白酶自加工成熟 | 第27-28页 |
| ·蛋白酶自加工过程中的结构变化 | 第28-30页 |
| ·影响蛋白酶自加工成熟的因素 | 第30-35页 |
| 4. 蛋白酶的表达及包含体变性与复性 | 第35-42页 |
| ·蛋白质表达体系 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌表达体系 | 第36-38页 |
| ·信号肽 | 第38-40页 |
| ·包含体及其溶解与复性 | 第40-42页 |
| 5. 圆二色(Circular dichroism,CD)谱法与蛋白质的二级结构 | 第42-43页 |
| 6. 本研究的目的、内容和意义 | 第43-46页 |
| 第二章 材料和方法 | 第46-70页 |
| 1. 实验材料 | 第46-52页 |
| ·菌种和质粒 | 第46-48页 |
| ·药品和试剂 | 第48-49页 |
| ·培养基和溶液配制 | 第49-52页 |
| 2. 实验方法 | 第52-70页 |
| ·嗜热菌Bacillus sp.WF146总DNA的提取 | 第52-53页 |
| ·重组质粒的试剂盒提取 | 第53页 |
| ·PCR | 第53-59页 |
| ·重组质粒的构建 | 第59-61页 |
| ·WF146蛋白酶及其突变体的表达 | 第61页 |
| ·WF146蛋白酶酶原及其突变体的His-tag亲和层析纯化 | 第61-62页 |
| ·WF146蛋白酶成熟酶及其突变体成熟酶的杆菌肽亲和柱纯化 | 第62-63页 |
| ·蛋白质电泳检测 | 第63-64页 |
| ·WF146蛋白酶酶原加工成熟过程 | 第64页 |
| ·外源蛋白酶对活性位点突变体的限量酶解 | 第64-65页 |
| ·WF146蛋白酶酶活测定 | 第65-66页 |
| ·包含体的提取与复性 | 第66-67页 |
| ·WF146蛋白酶N端前肽与成熟酶区的混合复性 | 第67页 |
| ·WF146蛋白酶N端前肽对成熟酶活性的抑制 | 第67页 |
| ·蛋白质Western blot分析 | 第67-68页 |
| ·蛋白质N端测序 | 第68-69页 |
| ·圆二色谱分析 | 第69-70页 |
| 第三章 WF146蛋白酶的成熟途径与加工机制 | 第70-90页 |
| 1. 结果与分析 | 第70-84页 |
| ·信号肽对WF146蛋白酶酶原成熟的影响及成熟过程中的信号肽加工 | 第70-73页 |
| ·WF146蛋白酶酶原成熟的两步加工机制 | 第73-76页 |
| ·WF146蛋白酶成熟过程中的分子内加工与分子间加工 | 第76-77页 |
| ·WF146成熟酶对酶原和中间体的反式加工——分子间加工 | 第77-79页 |
| ·外源蛋白酶对WF146蛋白酶酶原及中间体的加工作用 | 第79-81页 |
| ·WF146蛋白酶成熟过程中的结构变化 | 第81-84页 |
| 2. 讨论 | 第84-88页 |
| 3. 本章小结 | 第88-90页 |
| 第四章 Ca~(2+)对WF146蛋白酶成熟的影响及一种特殊中间体的形成 | 第90-106页 |
| 1. 结果与分析 | 第90-102页 |
| ·WF146蛋白酶成熟酶区的Ca~(2+)结合位点 | 第90-91页 |
| ·WF146蛋白酶的成熟过程需要Ca~(2+)参与 | 第91-93页 |
| ·WF146蛋白酶酶原在EDTA存在时可加工为特殊的中间体形式 | 第93-94页 |
| ·特殊中间体的性质一一可重新与其N端前肽连接为酶原 | 第94-97页 |
| ·WF146蛋白酶在Buffer B中的结构变化 | 第97-101页 |
| ·Na~+对WF146蛋白酶成熟的影响 | 第101-102页 |
| 2. 讨论 | 第102-105页 |
| 3. 本章小结 | 第105-106页 |
| 第五章 WF146蛋白酶N端前肽的功能研究 | 第106-120页 |
| 1. 结果与分析 | 第106-116页 |
| ·WF146蛋白酶的N端前肽 | 第106-108页 |
| ·WF146蛋白酶酶原包含体的溶解与复性 | 第108-109页 |
| ·N端前肽与成熟酶区的混合复性 | 第109-110页 |
| ·N端前肽对WF146成熟酶活性的抑制 | 第110-112页 |
| ·连接肽段带负电荷氨基酸残基的作用 | 第112-116页 |
| 2. 讨论 | 第116-119页 |
| 3. 本章小结 | 第119-120页 |
| 总结和展望 | 第120-122页 |
| 参考文献 | 第122-134页 |
| 在读期间发表论文 | 第134-136页 |
| 致谢 | 第136-138页 |
