| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-13页 |
| 第2章 材料与方法 | 第13-34页 |
| ·实验材料 | 第13-17页 |
| ·工具酶及分子量 Marker | 第13页 |
| ·主要生化试剂 | 第13-14页 |
| ·培养基、血清及添加剂 | 第14页 |
| ·试剂盒 | 第14页 |
| ·菌株 | 第14页 |
| ·质粒 | 第14-15页 |
| ·细胞系 | 第15页 |
| ·引物 | 第15-16页 |
| ·尤文肉瘤标本 | 第16页 |
| ·裸鼠 | 第16页 |
| ·生物信息学分析网站及软件 | 第16页 |
| ·主要仪器及设备 | 第16-17页 |
| ·实验方法 | 第17-34页 |
| ·细胞学实验 | 第17-20页 |
| ·组织学试验 | 第20-22页 |
| ·Real-time PCR | 第22-24页 |
| ·Taqman stem-loop RT -PCR 检测 microRNAs 的表达 | 第24-25页 |
| ·重组质粒的构建 | 第25-28页 |
| ·靶基因 3’UTR 萤光报告载体的构建 | 第28-29页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第29-30页 |
| ·双萤光报告实验 | 第30页 |
| ·Western blot | 第30-32页 |
| ·裸鼠试验 | 第32-33页 |
| ·统计学方法 | 第33-34页 |
| 第3章 结果 | 第34-50页 |
| ·let-7a 在尤文肉瘤细胞和组织中的表达量分析 | 第34-35页 |
| ·恢复尤文肉瘤细胞中 let-7a 的表达 | 第35-36页 |
| ·let-7a 在尤文肉瘤细胞系中的功能实验 | 第36-40页 |
| ·过表达 let-7a 对尤文肉瘤细胞系增殖、周期及凋亡功能的影响27 | 第36-38页 |
| ·过表达 let-7a 对尤文肉瘤细胞系侵袭及迁移功能的影响 | 第38-40页 |
| ·let-7a 靶基因的确定以及靶基因的功能研究 | 第40-46页 |
| ·let-7a 靶基因的预测和验证 | 第40-41页 |
| ·CDK6 在尤文肉瘤细胞系中的表达量 | 第41-42页 |
| ·敲低 CDK6 对尤文肉瘤细胞增殖、周期及凋亡的功能影响 | 第42-44页 |
| ·敲低 CDK6 对尤文肉瘤细胞侵袭及迁移能力的影响 | 第44-46页 |
| ·Rescue 实验验证 let-7a 通过直接靶向 CDK6 发挥抑癌作用 | 第46-48页 |
| ·let-7a 抑制尤文肉瘤细胞在裸鼠皮下移植瘤的生长 | 第48-50页 |
| 第4章 讨论 | 第50-53页 |
| 第5章 结论与展望 | 第53-54页 |
| ·小结 | 第53页 |
| ·展望 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-58页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第58-60页 |
| 综述 | 第60-67页 |
| 参考文献 | 第65-67页 |
