| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-17页 |
| ·燃料乙醇的概述 | 第9-10页 |
| ·乙醇的简介 | 第9页 |
| ·燃料乙醇的发展意义 | 第9页 |
| ·燃料乙醇的发展现状 | 第9-10页 |
| ·甘油途径代谢工程 | 第10-13页 |
| ·甘油途径的概述 | 第10-12页 |
| ·甘油途径改造的研究进展 | 第12-13页 |
| ·辅酶代谢工程 | 第13-15页 |
| ·辅酶代谢的概述 | 第13-14页 |
| ·辅酶代谢途径改造的研究进展 | 第14-15页 |
| ·课题的研究意义 | 第15-16页 |
| ·课题的主要研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-27页 |
| ·实验材料 | 第17-20页 |
| ·菌株与质粒 | 第17-18页 |
| ·引物 | 第18-19页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第19页 |
| ·培养基和培养条件 | 第19页 |
| ·主要仪器和设备 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-27页 |
| ·工业酒精酵母染色体的提取 | 第20页 |
| ·大肠杆菌(E.coli JM109)感受态细胞的制备及转化 | 第20-21页 |
| ·工业酒精酵母的醋酸锂转化 | 第21-22页 |
| ·常规分子生物学操作 | 第22页 |
| ·目的基因的 PCR 扩增 | 第22-23页 |
| ·敲除 GPD2 基因同时过表达 POS5 基因载体的构建 | 第23页 |
| ·敲除 FPS1 突变盒的构建 | 第23页 |
| ·游离表达载体 pYX212-POS5-Kan~r的构建 | 第23页 |
| ·酿酒酵母单倍体的杂交 | 第23页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae GDA1、GDA2、GDA 的构建 | 第23-24页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae PA1、PA2、PA 的构建 | 第24页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae PGDA1、PGDA2、PGDA 的构建 | 第24页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae FA1、FA1、FA 的构建 | 第24页 |
| ·甘油脱氢酶和二羟丙酮激酶酶活的测定 | 第24-25页 |
| ·NADH 激酶酶活的测定 | 第25页 |
| ·乙醇的发酵工艺 | 第25页 |
| ·胞内 NADH 浓度的测定 | 第25-26页 |
| ·发酵产物的分析测定 | 第26-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-48页 |
| ·甘油分解途径在工业酒精酵母中的加强表达 | 第27-32页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae GDA1、GDA2、GDA 的验证 | 第27-28页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae GDA1、GDA2 和 GDA 甘油脱氢酶和二羟丙酮激酶酶活的测定 | 第28页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae GDA1、GDA2、GDA 发酵性能的研究 | 第28-31页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae GDA1、GDA2、GDA 与原始菌胞内 NADH 含量的比较 | 第31-32页 |
| ·甘油合成途径和辅酶代谢途径对工业酒精酵母的调控 | 第32-37页 |
| ·敲除 GPD2 同时过表达 POS5 基因载体的构建 | 第32-34页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae PA1、PA2、PA 的验证 | 第34-35页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae PA1、PA、PA NADH 激酶酶活的测定 | 第35页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae PA 与原始菌 S.cerevisiae 发酵性能的研究 | 第35-36页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae PA 与原始菌 S.cerevisiae 胞内 NADH 含量的测定 | 第36-37页 |
| ·甘油分解途径、甘油合成途径和辅酶代谢途径对工业酒精酵母的共同调控 | 第37-41页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae PGDA1、PGDA2、PGDA 的验证 | 第37页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae PGDA1、PGDA2、PGDA NADH 激酶酶活的测定 | 第37页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae PGDA 与原始菌 S.cerevisiae 发酵性能的研究 | 第37-38页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae PGDA 与原始菌 S.cerevisiae 胞内 NADH 含量的测定 | 第38页 |
| ·综合四株重组菌与原始菌的发酵性能的比较 | 第38-40页 |
| ·综合四株重组菌与原始菌胞内 NADH 含量的比较 | 第40-41页 |
| ·小结 | 第41页 |
| ·验证敲除甘油通道蛋白基因 FPS1 对工业酒精酵母的影响 | 第41-48页 |
| ·敲除 FPS1 基因敲除突变盒的构建 | 第41-42页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae FA1、FA2、FA 的验证 | 第42-43页 |
| ·游离表达载体 pYX212-POS5-Kanr的构建 | 第43-44页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae PFA 的验证 | 第44页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae PFA NADH 激酶酶活的测定 | 第44-45页 |
| ·重组菌 S. cerevisiae FA、PFA 与原始菌发酵性能的比较 | 第45-47页 |
| ·重组菌 S. cerevisiae FA、PFA 与原始菌胞内 NADH 含量的测定 | 第47-48页 |
| 主要结论与展望 | 第48-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第55页 |
