| 目录 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-32页 |
| ·家蚕丝腺组织及生理功能 | 第16-17页 |
| ·家蚕丝素蛋白基因的结构 | 第17-19页 |
| ·蚕丝的组成 | 第17页 |
| ·丝素重链 | 第17-18页 |
| ·丝素轻链 | 第18页 |
| ·P25 | 第18-19页 |
| ·家蚕丝素蛋白基因的转录调控研究进展 | 第19-21页 |
| ·丝素蛋白重链基因的转录调控 | 第19-20页 |
| ·丝素蛋白轻链基因的转录调控 | 第20页 |
| ·P25基因的转录调控 | 第20-21页 |
| ·bHLH转录因子的研究进展 | 第21-23页 |
| ·bHLH转录因子的结构及分类 | 第21-22页 |
| ·bHLH转录因子功能 | 第22-23页 |
| ·家蚕bHLH转录因子的研究进展 | 第23-26页 |
| ·昆虫保幼激素信号传导途径 | 第26-30页 |
| ·昆虫保幼激素及其可能受体 | 第26-28页 |
| ·保幼激素在家蚕丝腺中的作用 | 第28-30页 |
| ·真核生物转录调控的研究方法进展 | 第30-32页 |
| 第二章 引言 | 第32-36页 |
| ·研究背景及意义 | 第32-33页 |
| ·拟解决问题和研究的主要内容 | 第33-34页 |
| ·研究思路与技术路线 | 第34-36页 |
| ·研究思路 | 第34-35页 |
| ·技术路线 | 第35-36页 |
| 第三章 家蚕Bmsage和Bmdimm原核表达及表达模式分析 | 第36-60页 |
| ·前言 | 第36-37页 |
| ·材料和方法 | 第37-48页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·主要溶液及配制 | 第37-40页 |
| ·生物进化分析 | 第40-41页 |
| ·RNA的提取 | 第41页 |
| ·PCR | 第41-42页 |
| ·目的片段的回收 | 第42页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第42-43页 |
| ·转化 | 第43页 |
| ·阳性克隆的筛选和验证 | 第43页 |
| ·表达质粒菌株的诱导 | 第43-44页 |
| ·蛋白表达形式的鉴定 | 第44页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第44页 |
| ·目的蛋白的提取 | 第44-45页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第45页 |
| ·免疫印迹 | 第45-47页 |
| ·RT-PCR | 第47页 |
| ·荧光定量PCR | 第47-48页 |
| ·结果与分析 | 第48-57页 |
| ·系统进化分析 | 第48-50页 |
| ·Bmsage和Bmdimm原核表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·Bmsage和Bmdimm原核表达纯化及多克隆抗体制备 | 第51-53页 |
| ·抗体效价 | 第53-54页 |
| ·五龄三天不同组织RT-PCR分析 | 第54页 |
| ·五龄三天不同组织western blot分析 | 第54-55页 |
| ·不同时期家蚕丝腺组织的Bmsage和Bmdimm的表达分析 | 第55-56页 |
| ·不同产丝品种丝腺中的Bmsage和Bmdimm的表达分析 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-60页 |
| ·Bmsage和Bmdimm原核表达纯化及多克隆抗体制备 | 第58页 |
| ·Bmdimm和Bmsage的组织表达特性分析 | 第58页 |
| ·Bmdimm和Bmsage的时期表达特性分析 | 第58-60页 |
| 第四章 Bmsage对家蚕丝素重链基因的调控 | 第60-80页 |
| ·前言 | 第60页 |
| ·材料和方法 | 第60-69页 |
| ·实验材料 | 第60-61页 |
| ·主要仪器 | 第61页 |
| ·主要溶液及配制 | 第61-62页 |
| ·载体构建 | 第62-64页 |
| ·SDS-PAGE | 第64页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第64-65页 |
| ·far-western blot | 第65-66页 |
| ·ELISA | 第66页 |
| ·免疫共沉淀 | 第66-67页 |
| ·免疫荧光 | 第67页 |
| ·重组蛋白纯化 | 第67页 |
| ·细胞培养与转染步骤 | 第67-68页 |
| ·细胞的裂解与荧光素酶活性的测定 | 第68页 |
| ·核蛋白的抽提 | 第68页 |
| ·Western blot | 第68-69页 |
| ·结果与分析 | 第69-78页 |
| ·SGF1表达载体构建、原核表达纯化及多克隆抗体制备 | 第69-70页 |
| ·SGF1在家蚕五龄三天不同组织中的分布 | 第70-71页 |
| ·Bmsage与SGF1相互作用 | 第71-74页 |
| ·fib-H启动子A和B位点EMSA分析 | 第74-75页 |
| ·fib-H基因启动子缺失分析 | 第75-78页 |
| ·讨论 | 第78-80页 |
| 第五章 Bmdimm对家蚕丝素重链基因的调控 | 第80-98页 |
| ·前言 | 第80页 |
| ·材料和方法 | 第80-85页 |
| ·实验材料 | 第80-81页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第81页 |
| ·主要溶液及配制 | 第81页 |
| ·启动子序列分析 | 第81页 |
| ·表达载体构建 | 第81-82页 |
| ·染色质免疫共沉淀 | 第82-83页 |
| ·qRT-PCR | 第83-84页 |
| ·核蛋白的抽提 | 第84页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第84页 |
| ·Far-western blot | 第84页 |
| ·ELISA | 第84-85页 |
| ·免疫共沉淀 | 第85页 |
| ·免疫荧光 | 第85页 |
| ·细胞培养与转化 | 第85页 |
| ·荧光素酶活测定 | 第85页 |
| ·定点突变 | 第85页 |
| ·结果与分析 | 第85-96页 |
| ·fib-H基因启动子调控元件预测 | 第85-86页 |
| ·染色质免疫共沉淀 | 第86页 |
| ·fib-H启动子E-box位点缺失分析 | 第86-87页 |
| ·fib-H启动子E-box的EMSA分析 | 第87-90页 |
| ·Bmdimm点突变分析 | 第90页 |
| ·Bmdimm与Bmsage相互作用 | 第90-93页 |
| ·Bmdimm和Bmsage启动子元件分析 | 第93页 |
| ·Bmdimm和Bmsage启动子SGF1结合的顺式元件EMSA分析 | 第93-94页 |
| ·SGF1上调Bmdimm和Bmsage的表达 | 第94-96页 |
| ·讨论 | 第96-98页 |
| 第六章 保幼激素对家蚕丝素重链基因的调控 | 第98-112页 |
| ·前言 | 第98-99页 |
| ·材料和方法 | 第99-102页 |
| ·实验材料 | 第99页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第99页 |
| ·主要溶液及配制 | 第99页 |
| ·dsRNA合成 | 第99-100页 |
| ·组织离体培养 | 第100页 |
| ·总RNA提取 | 第100页 |
| ·qRT-PCR | 第100-101页 |
| ·BmKr-h1和BmMet2真核表达载体构建 | 第101页 |
| ·细胞培养与保幼激素类似物处理 | 第101-102页 |
| ·结果与分析 | 第102-109页 |
| ·家蚕五龄幼虫保幼激素类似物处理以及Bmdimm的表达 | 第102-103页 |
| ·家蚕丝腺组织离体培养 | 第103页 |
| ·保幼激素类似物对BmKr-h1表达的影响 | 第103-104页 |
| ·在家蚕胚胎细胞中JHA对Bmdimm表达的影响 | 第104-106页 |
| ·BmKr-h1位于BmMet2下游上调Bmdimm的表达 | 第106-109页 |
| ·讨论 | 第109-112页 |
| 第七章 综合与结论 | 第112-114页 |
| 参考文献 | 第114-124页 |
| 附录 | 第124-128页 |
| 论文的创新点 | 第128-130页 |
| 论文发表与参加课题 | 第130-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
